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如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI、SamI的酶切位点，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到ampR或tctR中会导致相应的基因失活（ampR表示氨苄青霉素抗性基因，tctR表示四环素抗性基因）。回答下列问题：
（1）目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些_________。在基因工程中使用的载体除质粒外，还有___________、动植物病毒等，它们来源不同，在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。
（2）一般为避免在构建重组质粒时出现自身环化，该质粒用限制酶切割时应该用________酶进行切割，切割过程中消耗了___________个水分子。目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称之为_____________________。构建出来的基因表达载体在受体细胞内表达时，RNA聚合酶识别和结合位点是____________。
（3）若将此质粒用EcolR I酶切割后，与用EcolR I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌（大肠杆菌本身不含该质粒），结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。其中，可在含氨苄青霉素的培养基上生存下来的大肠杆菌是____________，能在同时含氨苄青霉素和四环素的培养基上生存的是______________。
（4）假如该质粒载体为来自土壤农杆菌的Ti质粒，将其携带的抗虫基因整合到某植物细胞的染色体DNA上，将该细胞通过植物组织培养技术培育成植株后，发现其并无抗虫特性，其可能的原因是__________（答出1种情况即可）
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下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
据图回答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、 三种。若 要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 。
（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。
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下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
据图回答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI 酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_______________、_____________、__________三种。若 要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行____________。
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_________。
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_________，其合成的产物是_________。
（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_______。
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图为某种质粒表答载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR 为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答：
(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________、________、________三种 。若要从这些连接产物中分离出________，需要对这些连接产物进行分离纯化。
(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是。
(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________。
(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是________。
来
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下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：
（1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的________酶；二是将目的基因与运载体拼接的________酶；三是作为运载体的质粒。
（2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“________”、“________”、“________”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是________，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
（3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是。
（4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的________。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是________。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是________。是因为这种微生物很容易侵染到________
中，从而把它的Ti质粒上的________转移到受体细胞染色体的DNA上。
（5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是________；作用于b位置的酶是
________。
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如图为某种质粒简图，如图表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制 性核酸内切酶EcoRI、BamHI、HindⅢ的酶切位点。下列有关叙述错误的是
A. 如果用EcoRI对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种
B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRI酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoR I酶切点有1个
C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHI和HindⅢ两种限制酶同时处理
D. —个图1所示的质粒分子经EcoRI切割后，含有2个游离的磷酸基团
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如图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列有关叙述正确的是( )
A. 将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，在DNA连接酶作用下，生成由两个DNA片段之间连接形成的产物有两种
B. DNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来形成一个重组质粒，该过程形成两个磷酸二酯键
C. 为了防止目的基因反向粘连和质粒自身环化，酶切时可选用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠ
D. 能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞表明该目的基因已成功导入该细胞
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（一）图（a）中的三个 DNA 片段上依次表示出了 EcoRI、BamHI 和 Sau3AI 三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体的示意图（载体上的 EcoRI、Sau3AI 的切点是唯一的）
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经 BamHI 酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被 _______________酶切后的产物连接。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组质粒，如图（c）所示。这三种重组质粒中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_______________。不能表达的原因是___________。
（3） DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，它作用对象是 ________键。
（二）丝素蛋白是家蚕的一种分泌性复合蛋白，由丝素蛋白重链（FibH）、丝素蛋白轻链（Fibl）和 P25 糖蛋白组成。将 Fibl 基因导入大肠杆菌（不含质粒 A）并实现表达的过程如图所示。
①构建重组质粒时要用到的工具酶是________________。
②接种在含氨苄青霉素培养基上的大肠杆菌，有的不能形成菌落，原因是____________。
③影印接种就是用丝绒做成与平板大小相近的印章，然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒印章上，轻 轻印一下，再把此印章在新的培养基平板上轻轻印一下。经培养后，比较新平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置，推测可能导入了重组质粒的菌落是 ____________（用字母表示）。
④目的基因成功表达的标志是_______________。
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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被_____________酶切后的产物连接，理由是两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端是 ___________________________________
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有______，不能表达的原因是_____________________________________________________________________________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_____________。
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图（a）中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的是___________，不能表达的原因是____________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。