菊花是重要观赏花卉，为增加菊花花色类型，某科研小组从植物A的基因文库中选出花色基因C（图1），并将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。请回答下列问题：
（1）利用PCR技术可获赠花色基因C，扩增前需根据花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链。
（2）构建基因表达载体时，需用EcoRⅠ分别处理C基因和质粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；当C基因和质粒连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是_____________。
（3）用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织时，需在培养基中添加酚类物质，其目的是_____________；C基因的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是_____________；为筛选出成功转化的菊花细胞，应在筛选培养基中添加_____________。
（4）经检测部分菊花植株的基因组中已有C基因，但没有发现基因C对应花色，为分析原因，可从分子水平上采用_____________技术检测C基因是否转录。
高三生物非选择题困难题
菊花是重要观赏花卉，为增加菊花花色类型，某科研小组从植物A的基因文库中选出花色基因C（图1），并将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。请回答下列问题：
（1）利用PCR技术可获赠花色基因C，扩增前需根据花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链。
（2）构建基因表达载体时，需用EcoRⅠ分别处理C基因和质粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；当C基因和质粒连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是_____________。
（3）用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织时，需在培养基中添加酚类物质，其目的是_____________；C基因的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是_____________；为筛选出成功转化的菊花细胞，应在筛选培养基中添加_____________。
（4）经检测部分菊花植株的基因组中已有C基因，但没有发现基因C对应花色，为分析原因，可从分子水平上采用_____________技术检测C基因是否转录。
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为增加菊花的花色类型，研究者从其他植物的cDNA文库中提取出花色基因C(图1),拟将其与质粒（图2)重组，再借助农杆菌导入菊花细胞中。图3从上到下依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。请分析回答：
（1）利用PCR技术扩增目的基因C的原理是_____________。
（2）图2所示质粒被___________切割获得的产物可与图1所示基因C连接，理由是___________。
（3）经BamHⅠ处理后构建的重组质粒导入菊花细胞后，基因C不能表达，原因是质粒酶切部位的两端无，导致基因C不能_____________。
（4）在添加四环素的固体培养基上，___________(填“能”或“不能”）筛选出含有插入基因C的重组质粒的农杆菌单菌落，原因是_________________________。
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为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。
下列操作与实验目的不符的是
A. 用限制性核酸内切酶EcoRI和连接酶构建重组质粒
B. 用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞
C. 在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞
D. 用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上
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为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。
下列操作与实验目的不符的是
A．用限制性核酸内切酶EcoRI和连接酶构建重组质粒
B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞
C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞
D．用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上
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为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与Ti质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。回答下列问题：
（1） PCR技术所用到的关键酶是__________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是__________。
（2）图1是花色基因C两侧被EcoR I酶切后所形成的末端结构，请写出EcoR I酶识别序列并标出切点：__________（用“↓”表示切点位置）。图2中EcoRI酶所识别的位点应在Ti质粒的__________片段上。
（3）将导人目的基因的菊花细胞培养成植株需要利用__________技术，其原理是__________。
（4）在个体生物学水平上，如何鉴定转基因菊花培育是否成功？____________________
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为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。
下列操作与实验目的不符的是（ ）
A. 用限制性核酸内切酶 EcoR I和连接酶构建重组质粒
B. 用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞
C. 在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞
D. 用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上
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为了改善向日葵花色，提高其观赏价值，某科研团队从其他植物中克隆出花色K基因（图1中黑色部分），将其与质粒（图2）重组，利用农杆菌转化法导入到向日葵中，通过K基因的成功表达间接控制向日葵形成新的花色。EcoRI、SacI、XbaI、HindIII为不同的限制酶，箭头为限制酶在相应位置上的切割部位。请据此回答问题：
（1）为增加K基因的数量，可使用_______技术，但前提是________________________，以便根据这一序列合成引物。
（2）构建K基因的重组质粒时，应选用限制酶______________________，对目的基因和质粒进行切割，再用DNA连接酶将其连接为重组质粒，导入受体细胞，经__________________________技术培育为转基因植物。
（3）一个基因表达载体的组成，除图1、图2中标出部分之外，还必须含有__________，图中Ampr（氨苄青霉素抗性基因）的作用是____________________。
（4）若要检测转基因向日葵的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是采用DNA分子杂交技术，即用________________标记的___________作探针，如果显示出杂交带，则表明目的基因已插入染色体DNA中。
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菊天牛是菊花的主要害虫之一，为达到防治目的，科研人员通过转基因技术培育出了抗虫菊花。请回答下列问题：
（1）可用_____处理土壤农杆菌，使其处于_____以便吸收重组质粒。
（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_____的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_____上，最终形成转基因植株。
（3）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的的基因时，需根据_____的脱氧核苷酸序列设计特异引物，以_____为模板进行第一轮扩增。
（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示：
| 组别 | 死亡率（%） | |
| 实验组 | 转基因植株1 | 60.00 |
| 转基因植株2 | 53.33 | |
| 对照组 | 13.33 |
①对照组应饲喂等量的_____菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物。
②据表分析，实验组与对照组_____差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。
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（2016春•浙江月考）科研人员拟将已知的花色基因（目的基因）转人矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛．请回答：
（1）为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA，再与经 （A．氯化钙、B．氯化钠、C．蔗糖、D．葡萄糖）处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进人大肠杆菌．用 的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液 接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成 ，再进行鉴定和扩大培养．
（2）从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA，用 分别切割含目的基因的 DNA和农杆菌的Ti质粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA并导入农杆菌．
（3）取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70% 浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用 清洗，作为转基因的受体材料．
（4）将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移 至加有适当配比生长调节剂的MS培养基（含蔗糖、琼脂和抗生素，下同）上，使叶小叶先脱分化形成 ．再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至 （ A．LB培养基B．MS培养基+适宜浓度NAAC．MS培养基+适宜浓度BA D．NAA/BA小于1的MS培养基）上生根，形成完整植株．
（5）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的 等条件下进行炼苗．提取叶片组织的DN A，采用PCR技术 目的基因，鉴定目的基因是否成功导入．
（6）为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的 性状．
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科研人员拟将已知的花色基因（目的基因）转人矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛．请回答：
（1）为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA，再与经 （A．氯化钙、B．氯化钠、C．蔗糖、D．葡萄糖）处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进人大肠杆菌．用 的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液 接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成 ，再进行鉴定和扩大培养．
（2）从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA，用 分别切割含目的基因的 DNA和农杆菌的Ti质粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA并导入农杆菌．
（3）取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70% 浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用 清洗，作为转基因的受体材料．
（4）将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移 至加有适当配比生长调节剂的MS培养基（含蔗糖、琼脂和抗生素，下同）上，使叶小叶先脱分化形成 ．再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至 （ A．LB培养基B．MS培养基+适宜浓度NAAC．MS培养基+适宜浓度BA D．NAA/BA小于1的MS培养基）上生根，形成完整植株．
（5）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的 等条件下进行炼苗．提取叶片组织的DN A，采用PCR技术 目的基因，鉴定目的基因是否成功导入．
（6）为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的 性状．
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