图是利用正常大鼠制备转基因大鼠的流程示意图，回答下列问题。
（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端。当质粒用限制酶切割一次以后，形成 个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，再用连接酶连接两者之间的黏性末端，则会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况，其最可能的原因是 。
（2）卵母细胞除从活体 中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取，采集到的精子必须经过 处理后，才能与卵母细胞结合，完成受精作用。
（3）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是 、早期胚胎培养和胚胎移植。
高三生物综合题中等难度题
图是利用正常大鼠制备转基因大鼠的流程示意图，回答下列问题。
（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端。当质粒用限制酶切割一次以后，形成 个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，再用连接酶连接两者之间的黏性末端，则会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况，其最可能的原因是 。
（2）卵母细胞除从活体 中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取，采集到的精子必须经过 处理后，才能与卵母细胞结合，完成受精作用。
（3）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是 、早期胚胎培养和胚胎移植。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
图1表示某细菌的质粒中相关限制酶的切割位点，图2表示目的基因所在的DNA中相关限制酶的切割位点。请分析并回答下列问题：
(1)用SmaⅠ限制酶处理图1所示的一个质粒会得到
种DNA片段，会增加个游离的磷酸基团。
(2)在实际操作中，最好选用 (填限制酶名称)同时切割质粒和含目的基因的外源DNA，其优点是能避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，以及便于筛选需要。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次，需要个引物。
(3)为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌，实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含 (抗生素)的培养基甲中，然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含 (抗生素)培养基乙上，以筛选获得含重组质粒的细菌。含重组质粒的大肠杆菌在两种培养基的生长情况是。
经检测：在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
我国科研人员应用基因工程技术制备生物源鲜味八肽，下图为重组质粒构建过程及限制酶切割位点。请回答下列问题：
（1）已知鲜味八肽的氨基酸序列，科研人员利用序列设计软件，通过________法，最终得到DNA片段的序列为：
5＇-CCCAGATCTGGG……TAGGAATTCGAGCTC-3＇
3＇-GGGTCTAGACCC……ATCCTTAAGCTCGAG-5＇
用限制酶切割上述DMA片段后，获得含目的基因的DNA片段为__________________。
（2）使用上述两种限制酶较只使用一种限制酶的优点是_________________。构建该重组质粒过程中T4DNA连接酶________(能、否）用E.coliDNA连接酶替代，原因是_________________。
（3）目的基因PCR时，需先合成相应的引物。下列引物中热稳定性较高的是_____________。
引物P1:5＇-TAATACGACTCACTATAG-3＇
引物P2:5＇-AGCAAGAGACTCCTCATCACCCTT-3＇
高三生物综合题困难题查看答案及解析
图一是利用基因工程生产人胰岛素的主要流程图，图二是生产过程中所制备的带有目的基因的供体DNA分子及运载体（质粒）的示意图。箭头所指为相应限制酶的识别位点，Tetr表示四环素抗性基因，Tetr上游有基因C，基因C的表达产物会阻断Tetr基因的表达。请回答下列问题：
（1）图一中的供体细胞是______________。
（2）第②步中需要的酶是_______，第④步常用_____________来处理细菌。（3）若图一所示过程中以 Tetr为标记基因，则第③步中应选用限制酶____________________对供体DNA和质粒进行切割；为检测转化结果，将经第④步处理后的大肠杆菌培养液接种在含有_____________的培养基上，长出的菌落就是导入重组质粒的菌落。
（4）检测目的基因能否在大肠杆菌细胞中表达，常用的方法为______________________。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，
图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基因。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是________
。
（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。
（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。
高三生物综合题简单题查看答案及解析
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用______________催化连接，两个DNA片段的连接结果有________种。
（2）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_____________________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和 ．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 ．
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶．
（4）反转录作用的模板是 ，产物是 ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术．
（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体．
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 ．
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和 ．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 ．
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶．
（4）反转录作用的模板是 ，产物是 ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术．
（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体．
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 ．
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
根据基因工程的有关知识,回答下列问题:
(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有 和 。
(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是 。
(3)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即 DNA连接酶和 DNA连接酶。
(4)反转录作用的模板是 ,产物是 。若要在体外获得大量反转录产物,常采用 技术。
(5)基因工程中除质粒外, 和 也可作为运载体。
(6)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是________ 。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有▲ 个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越▲ 。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是▲ 。
（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止▲ 。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入▲ 酶。
（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了▲ 。
（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在▲ 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
高三生物综合题简单题查看答案及解析