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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。据图回答下列问题：
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是 。
（2）一个完整的基因表达载体除了目的基因、复制原点、启动子和终止子外，还应包括 。若需利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是 和 。
（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因
。（2分）
（4）下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
①图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。
。
②现用EcoRI酶切重组成功的质粒（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计），酶切后进行电泳观察，会出现长度为 kb的片段。（2分）
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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B
和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知。若ABC浇清水，DEF浇的水中含有草甘膦，上述DEF植物中，肯定能健康成长的是 。
（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其作用是。
（3）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有 种DNA片段。
（4）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？ 请说明理由 。
（5）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒（ ）
A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开
B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开
C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开
D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开
（6）图2中不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是 。
（7）要想检测导入的EPSPS基因是否表达，在分子水平上可用 方法进行检测。
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（16分）草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。据图回答下列问题：
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入____________。
（3）一个完整的基因表达载体除了具备复制原点、启动子和终止子外，还应包括______和________。
（4）若需利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是________和________。
（5）通常用____________法将EPSPS基因导入植物体内。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因____________。
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回答下列关于基因工程的问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：
.
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。
（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图I所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图I和II所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图II所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_______________________________________________________________。
下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。
（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）
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回答下列关于基因工程的问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内， 从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。
（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图1所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图1和2所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_____________。
下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。
（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）
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（13分）回答下列有关基因工程问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是 。
图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。
酶M特异性剪切的DNA片段是
，则酶N特异性剪切的DNA片段是 。
多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有 种。
图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。
（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入 。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。
（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是 。
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草甘膦是一种低毒性的广谱除草剂，能非特异性侵入并杀死所有的植物，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。科学家从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，以提高其对草甘膦的耐受性。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 要筛选出含EPSPS基因的突变菌株，应在培养基中加入EPSPS酶
B. 可用抗原—抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物
C. EPSPS基因转录时以DNA的两条链同时作为模板，提高转录的效率
D. EPSPS基因导入小麦叶肉细胞的叶绿体后，该性状可随传粉过程遗传
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草甘膦是一种低毒性的广谱除草剂，能非特异性侵入并杀死所有的植物，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。科学家从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，以提高其对草甘膦的耐受性。下列有关叙述正确的是（ ）
A．要筛选出含EPSPS基因的突变菌株，应在培养基中加入EPSPS酶
B．可用抗原—抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物
C．EPSPS基因转录时以DNA的两条链同时作为模板，提高转录的效率
D．EPSPS基因导入小麦叶肉细胞的叶绿体后，该性状可随传粉过程遗传
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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，影响植物正常生长，最终导致植物死亡。目前，发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过转基因处理，但是否成功未知（转基因处理过程不影响植物正常生长）。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有限制酶切点。据图回答：
（1）若A、B、C浇清水，D、E、F浇含有草甘膦的水，则A～F植物中，一定能正常生长的是_________________。
（2）一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外，还应包括_________________。若利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是_________________和_________________。
（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F没有表现出抗性，分析可能的原因_________________。
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EPSPS是叶绿体中的一种酶，它能催化芳香族氨基酸的合成；草甘膦是一种除草剂，它能竞争性抑制EPSPS的作用,而使植物死亡。
（1）普通大豆施用草甘膦之后，电镜下可以看到叶绿体很快变形，其原因是氨基酸合成受阻直接影响了________
的合成，使叶绿体内的膨胀、破裂，导致其结构和功能严重受损从而使植物死亡。
（2）研究人员以大豆“黑农37”胚尖为外植体，利用农杆菌介导法将EPSPS基因成功转入大豆，大豆产生了更多的EPSPS来抵抗草甘膦，从而使其不被杀死。
（3）要测定EPSPS基因最终是否整合到大豆的某一染色体上，可用________方法，或直接测定该染色体的________。
（4）上述过程③的操作首先是将胚尖放入到含________的侵染液中处理，然后再转入到含________的培养基中培养形成抗性芽，最后长成抗草甘膦的大豆植株。大豆胚尖细胞能长出一个完整植株的原理是胚尖细胞具有________。
（5）抗性芽的诱导形成过程如下：配制完全培养基，在培养基中加入0.2mg/L吲哚丁酸和不同浓度的6-BA等物质，再将大豆胚尖接种到培养基上进行培养，结果如下表：
| 6-BA浓度 (mg/L) | 抗性芽的诱导率(%) |
| 2周 | 3周 | 4周 |
| 0 | 29.7 | 42.7 | 44.5 |
| 1 | 30.1 | 42.4 | 53.7 |
| 2 | 35.2 | 72.1 | 89.1 |
| 3 | 34.6 | 66.1 | 84.5 |
| 4 | 34.7 | 58.6 | 62.8 |
| 5 | 31.3 | 56.1 | 61.4 |
上述结果表明，随着培养基中6-BA浓度的增加，抗性芽的诱导率________。诱导抗性芽的6-BA最适浓度为________。抗性芽的形成必须要经过________过程。
和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知。若ABC浇清水，DEF浇的水中含有草甘膦，上述DEF植物中，肯定能健康成长的是
，则酶N特异性剪切的DNA片段是