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小鼠基因靶向敲除技术是采用工程技术手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠bb。分析回答下列问题：
（1）“基因靶向敲除”技术采用了基因工程的技术手段。基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过 和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性。
（2）基因表达载体应包括启动子、 、 、标记基因。目的基因导入受体细胞后，首先要检测转基因生物 ，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键。
（3）为获得“基因靶向敲除”的小鼠个体，则应将同源目的基因导入小鼠的 。此外还必须经过 和胚胎移植等胚胎工程的技术手段，最终由受体母鼠生下来。
（4）按上述“基因靶向敲除”操作获得的多只雌雄小鼠都是杂合子，人们想在此基础上获得一个含纯合目的基因的个体。简要的方案是： 。
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小鼠基因靶向敲除技术是采用工程技术手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用．例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠bb．分析回答下列问题：
（1）“基因靶向敲除”技术采用了基因工程的技术手段．基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过 和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性．
（2）基因表达载体应包括启动子、 、 、标记基因．目的基因导入受体细胞后，首先要检测转基因生物 ，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键．
（3）为获得“基因靶向敲除”的小鼠个体，则应将同源目的基因导入小鼠的 ．此外还必须经过 和胚胎移植等胚胎工程的技术手段，最终由受体母鼠生下来．
（4）按上述“基因靶向敲除”操作获得的多只雌雄小鼠都是杂合子，人们想在此基础上获得一个含纯合目的基因的个体．简要的方案是： ．
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小鼠基因敲除技术获得2007年诺贝尔奖，该技术采用基因工程、细胞工程、杂交等手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠。
（1）体外获得突变基因b的克隆的技术称_________________。
（2）基因敲除过程中的受体细胞是__________________细胞。外源基因是否导入受体细胞，可利用重组质粒上的________检测。
（3）将导入目的基因的受体细胞进行克隆，在某时期提取细胞培养液，测定每个细胞的DNA含量，结果如下图。在图中的B、C、D中，表示处于G2和M期的是________，在_______期进行作物（小麦、水稻）诱变育种工作实践可取得良好效果的是。
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小鼠基因敲除技术获得2007年诺贝尔奖，该技术采用基因工程、细胞工程、杂交等手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠。
（1）通过基因敲除，得到一只AABb小鼠。假设棕毛基因A、白毛基因a、褐齿基因B、黄齿基因b均位于常染色体上，现要得到白毛黄齿新类型小鼠，用来与AABb小鼠杂交的纯合亲本的基因型是________，杂交子代的基因型是_________。让F1代中双杂合基因型的雌雄小鼠相互交配，子代中带有b基因个体的概率是_____，不带B基因个体的概率是___________。
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回答下列I、II小题
I．（14分）“基因敲除”技术（通常叫基因打靶）的出现，可以准确地“敲除”DNA分子上的特定基因，以研究某一基因在生物个体发育和病理过程中的作用，从而为研究基因功能开辟了新途径。该技术的过程大致如下：
第一步：分离胚胎干细胞。从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞，在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：突变DNA的体外构建。获取与靶基因同源的DNA片断，利用基因工程技术在该DNA片段上插入neoR基因（新霉素抗性基因），使该片段上的靶基因失活。
第三步：突变DNA与靶基因互换。将体外构建的突变DNA转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到添加新霉素的培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）在上述的“基因敲除技术”中，采用的生物工程技术有________。
（2）“基因敲隙技术”以胚胎干细胞作为对象是因为胚胎干细胞具有____性。
（3）在靶基因中插入neoR基因的目的是________。
（4）基因敲除过程中外源基因是否导入受体细胞，可利用重组基因上的________进行检测。将失活靶基因导入胚胎干细胞的操作完成后，通常需要进行筛选，其原因是________。
（5）假设经过上图表示的过程，研究者成功获得一枚“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，并培育成一只雌性克隆小鼠，则其一个卵原细胞产生的卵细胞携带neoR基因的概率是__________。若该克隆雌鼠与普通小鼠交配，理论上该克隆雌鼠产下抗新霉素小鼠与不抗新霉素小鼠的比例为____ 。
II．（8分）菜豆种皮颜色由两对非等位基因A（a）和B（b）调控。A基因控制黑色素合成（A—显性基因一出现色素，AA和Aa的效应相同），B基因为修饰基因，淡化颜色的深度（B—显性基因—修饰效应出现，BB使色素颜色完全消失，Bb使色素颜色淡化）。现有亲代种子P1（纯种、白色）和P2（纯种、黑色），杂交实验如右图：
（1）①P1的基因型是____；F1的基因型是__________。
②F2中种皮为白色的个体基因型有________种，其中纯种个体大约占____。
（2）从F2取出一粒黑色种子，在适宜条件下培育成植株。为了鉴定其墓因型，将其与F1杂交，预计可能的实验结果，并得出相应的结论：
①若子代表现为____________，则该黑色种子的基因型为________。
②若子代表现为____________，则该黑色种子的基因型为________。
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胚胎干细胞（ES细胞）在生物学研究中具有十分重要的应用价值。
（1）上图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。在目的基因获取和基因表达载体构建过程中使用的工具酶有 。
（2）上图中完成第Ⅱ步操作得到由两个DNA切段连接成的产物有 种重组DNA分子；第Ⅲ步操作后，还需经过 的过程，才能将该ES细胞注射到囊胚中。
（3）ES细胞在功能上具有 的特点；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导，为因故失去手的患者提供新的“手”，该过程揭示了细胞 的机理。
（4）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，一般情况下，细胞中有D或S途径即能分裂增殖。人淋巴细胞中虽然有这两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠ES细胞中只有D途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加 促融，获得杂种细胞。若要从培养液中分离出杂种细胞，写出实验方法（不考虑机械方法），并说明理由。
方法：___________________________________________________________。
理由：___________________________________________________________。
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胚胎干细胞（ES细胞）在生物学研究中具有十分重要的应用价值。
（1）上图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。在目的基因获取和基因表达载体构建过程中使用的工具酶有 。
（2）上图中完成第Ⅱ步操作得到由两个DNA切段连接成的产物有 种重组DNA分子；第Ⅲ步操作后，还需经过 的过程，才能将该ES细胞注射到囊胚中。
（3）ES细胞在功能上具有 的特点；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导，为因故失去手的患者提供新的“手”，该过程揭示了细胞 的机理。
（4）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，一般情况下，细胞中有D或S途径即能分裂增殖。人淋巴细胞中虽然有这两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠ES细胞中只有D途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。若要从培养液中分离出杂种细胞，写出实验方法（不考虑机械方法），并说明理由。
方法：___________________________________________________________。
理由：___________________________________________________________。
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【选修3——现代生物科技专题】
下图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞（ES细胞）中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。据图分析回答：
（1）天然质粒往往需要经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有___________（填序号）。
①标记基因 ②多个限制酶切割位点 ③对受体细胞无害 ④启动子 ⑤起始密码子
（2）该过程使用了工具酶___________和DNA连接酶，完成目的基因的获取和___________。
（3）过程III常用的方法是___________，第III步操作后，还需经过筛选出含___________的重组DNA分子胚胎干细胞的过程，才能将该胚胎干细胞注射到囊胚中。
（4）改造后的胚胎干细胞移植回囊胚能继续发育成小鼠，其根本原因是______________________。
（5）胚胎干细胞在功能上具有发育的全能性，形成组织、器官必须要进行______________________。
（6）若经过图示过程培育成的小鼠仍为黑色，则能否说明未成功导入棕褐毛基因？_________。你的理由是____________________________________________________________。
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下图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。请据图分析并回答问题。
(1)在目的基因获取和构建基因表达载体过程中需要使用的限制酶是_______________，完成此过程还需要的工具酶是_______________ 。
(2)过程Ⅲ常用的方法是_______________。为提高操作的成功率，过程Ⅲ后，需筛选出_______________，才能进行过程IV。
(3)图示技术表明，ES细胞在功能上具有_______________性；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导分化，为因故失去手的患者提供新的“手”，完成该过程的实质是_______________。
(4)若经图示过程培育成的小鼠仍为黑色，则能否说明未成功导入棕褐毛基因？_______________，你的理由是_______________。
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下图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。请据图分析并回答问题。
（1）在目的基因获取和构建基因表达载体过程中需要使用的限制酶是 ，完成此过程还需要的工具酶是 o
（2）过程Ⅲ常用的方法是 。为提高操作的成功率，过程Ⅲ后，需筛选出 ，才能进行过程IV。
（3）图示技术表明，ES细胞在功能上具有 性；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导分化，为因故失去手的患者提供新的“手”，完成该过程的实质是 。
（4）若经图示过程培育成的小鼠仍为黑色，则能否说明未成功导入棕褐毛基因？ ，你的理由是 。
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