为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，一般可进行如下步骤筛选：第一步：将大肠...

为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，一般可进行如下步骤筛选：

第一步：将大肠杆菌在含　　　　　　　 的培养基上培养，得到如图1的菌落。

第二步：再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含　　　　　　 的培养基上培养，得到如图2的结果（空圈表示与图1对照无菌落的位置）。

第三步：选出图1培养皿中的某些菌落进行培养，即可得到含重组质粒的大肠杆菌。请在图1中圈出含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是________           。

（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的________基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________的过程。为了促进该过程，应该用________处理大肠杆菌。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选 ________。能在C中生长的大肠杆菌有________种。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）________上，请在图中相应的位置上圈出来。

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是________。

（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________的过程。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选________。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）________上。

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是 __________。

（2）经过①②步骤后，有些质粒上的 ____ 基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________的过程。为了促进该过程，应该用 ________ 处理大肠杆菌。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选 _____________________。能在C中生长的大肠杆菌有 _____种。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”） ______上，请在图中相应的位置上圈出来。

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是________。

（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________的过程。为了促进该过程，应该用________处理大肠杆菌。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选________。能在C中生长的大肠杆菌有________种。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）________上，请在图中相应的位置上圈出来。

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是___________ 。

（2）经过①②步骤后，有些质粒上的____ 基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________的过程。为了促进该过程，应该用________ 处理大肠杆菌。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选_____________________ 。能在C中生长的大肠杆菌有_____ 种。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）______ 上，请在图中相应的位置上圈出来。

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（8分）科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的过程。为了促进该过程，应该用＿＿＿＿＿处理大肠杆菌。

（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。能在C中生长的大肠杆菌有＿＿＿种。

（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）＿＿＿＿上，请在图中相应的位置上圈出来。

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科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答问题：

(1)步骤①和②中常用的工具酶是________________和________________。

(2)经过①和②步骤后，有些质粒上的________________基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

(3)步骤③是________________的过程。为了促进该过程，应该用________处理大肠杆菌。

(4)步骤④是将三角瓶内的大肠杆菌接种到含有四环素的培养基A上培养，目的是筛选________________。能在A中生长的大肠杆菌有________种。

(5)步骤⑤是用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B(含氨苄青霉素和四环素)和C(含四环素)两个培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”) ________上，请在图中相应位置上圈出来。

__________

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将重组质粒导入大肠杆菌后，需接种在培养基培养，以便进一步筛选目的菌株，培养基成分如下：

（1）上述培养基中应加入的物质X是___________，利用培养基分离纯化目的菌株，可用_______（填“平板划线法”、“稀释涂布平板法”、“平板划线法或稀释涂布平板法”），理由是__________________。接种后，应将培养基放入37°C恒温箱中倒置培养，倒置的目的是__________________。

（2）可将平板上的单个菌落分别挑取并接种在_____________（填“固体”或“液体”）培养基中扩大培养。在接种过程中应注意的无菌操作有：_______（至少写2个）。

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研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是

A. 构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶

B. 使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组

C. 含有重组质粒的大肠杆菌可以在添加氨苄青霉素的培养基上生存

D. 利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙

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