大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程，请据图回答下列相关问题：
（1）图中切割目的基因时用到________种限制酶，而切割质粒时用到的限制酶是______________。
（2）在基因工程的“四步曲”中，_________是基因工程的核心步骤，________的阶段没有碱基互补配对现象。
（3）图中的受体细胞是___________，其作为受体细胞的优点是___________(至少答出两点）。
（4）在培养基中加入X-gal和IPTG的目的是___________；结合题干信息，菌落①②③的颜色分别是__________、__________、____________。
高三生物非选择题困难题
大肠杆菌的质粒上含有LacZ基因，其编码的产物β半乳糖苷酶在x-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程，回答下列问题：
(1)在基因工程中，大肠杆菌质粒通常作为___________,除此以外，基因工程操作还需要___________和___________两种工具。
(2)基因工程的核心操作步骤是______________________。
(3)本题中将目的基因导入受体细胞的方法是___________，目的基因在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为___________。
(4)加入了X-gal和IPTG培养基被称为___________培养基，能够筛选出含目的基因的菌落是___________(填“①”“②”或“③”)，颜色是___________。
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大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程，请据图回答下列相关问题：
（1）图中切割目的基因时用到________种限制酶，而切割质粒时用到的限制酶是______________。
（2）在基因工程的“四步曲”中，_________是基因工程的核心步骤，________的阶段没有碱基互补配对现象。
（3）图中的受体细胞是___________，其作为受体细胞的优点是___________(至少答出两点）。
（4）在培养基中加入X-gal和IPTG的目的是___________；结合题干信息，菌落①②③的颜色分别是__________、__________、____________。
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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′基因（内含EcoRI的酶切位点），其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal 和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图所示。请据图回答：
（1）限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是-G↓AATTC-，SmaⅠ的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是_____________。
（2）转化过程中，大肠杆菌应先用_____________处理，使其成为 细胞。
（3）菌落①②③中颜色为白色的是__________，原因是________________________________。
（4）菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_____________。
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在含有X-gal和IPTG物质的培养基上，大肠杆菌质粒上的lacZ‘基因如表达出产物β-半乳糖苷酶，则能使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞。’请据图回答：
（1）限制酶EcoRI的识别序列和酶切位点是-G↓,AATTC-，SmaI的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-，图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是______________。限制酶EcoRI在质粒上的酶切位点在lacZ‘基因中，故该基因工程中，lacZ‘基因的作用为_____________基因。
（2）获取目的基因后，常利用__________技术在体外将其大量扩增，此过程需要一种特殊的酶叫______。
（3）转化过程中，大肠杆菌应先用_____________处理，使其成为_________________细胞。
（4）颜色为白色的是含有目的基因的菌落，原因是____________。
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大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：
（1）作为受体大肠杆菌应_________________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（目的是 ）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入 。
（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：
①
②
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大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：
（1）作为受体大肠杆菌应___________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（目的是________）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入________。
（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并析结果：
①________。
②________。
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大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：
（1）作为受体大肠杆菌应__________________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（增加其细胞壁的通透性）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入________。
（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：
①________。
②________。
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（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：
（1）作为受体大肠杆菌应______________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（目的是________）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入________。
（2）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入___________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导
入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：
①________。
②________。
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大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答：
（1）已获得的目的基因可利用_____________技术进行扩增。
（2）目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复___________键。
（3）将试管Ⅰ中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是____________________；大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理，目的是______________________________________。
（4）将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中除去含有大肠杆菌必需的营养物质和生长因子外，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出__________________。
（5）若观察到培养基上出现______色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是无论大肠杆菌是否导入重组质粒，菌落均会呈现_________。
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大肠杆菌PUC19质粒如下图所示。LacZ基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解X-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRI构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因）并进行检测。下列叙述错误的是
A．应用涂布法将受体菌群接种在培养基表面
B．培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal
C．挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌
D．应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养
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