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来源于某种野生植物的A基因表达出的多肽对多种致病微生物具有杀灭作用，将A基因导入油菜可显著提高油菜的抗病能力。
（1）下图是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技术扩增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___________。PCR—般要经历三十多次循环，在第3轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，这种DNA片段所占的比例为___________。
（2）通过SmaⅠ酶切割扩增后的DNA分子和质粒，利用___________酶连接切割后的DMA分子和质粒，将A基因插入质粒的启动子和终止子之间，构建___________。
（3）利用农杆菌转化法将A基因导入经___________形成的油菜愈伤组织细胞，在愈伤组织进一步培养过程中，MS培养基各成分用量减半，并添加质量浓度为0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。
（4）经检测，转入完整A基因的某些植物不能正确表达多肽，从A基因与质粒连接形成重组质粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。
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来源于某种野生植物的A基因表达出的多肽对多种致病微生物具有杀灭作用，将A基因导入油菜可显著提高油菜的抗病能力。
（1）下图是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技术扩增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___________。PCR—般要经历三十多次循环，在第3轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，这种DNA片段所占的比例为___________。
（2）通过SmaⅠ酶切割扩增后的DNA分子和质粒，利用___________酶连接切割后的DMA分子和质粒，将A基因插入质粒的启动子和终止子之间，构建___________。
（3）利用农杆菌转化法将A基因导入经___________形成的油菜愈伤组织细胞，在愈伤组织进一步培养过程中，MS培养基各成分用量减半，并添加质量浓度为0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。
（4）经检测，转入完整A基因的某些植物不能正确表达多肽，从A基因与质粒连接形成重组质粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
利用基因工程技术培育马铃薯新品种，目前已经取得丰硕成果。请根据教材所学知识回答下列问题：
（1）马铃薯易患多种疾病，导致其产量不高。通过导入抗病基因并使其表达可以提高马钤薯产量，基因工程中使用最多的抗病基因是______________和病毒的复制酶基因。
（2）马铃薯是双子叶植物，常用_____________(方法)将目的基因导入马铃薯受体细胞中。构建好的基因表达载体基本结构包括目的基因、标记基因、 _________、 ___________、___________等五部分。
（3）科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯，其设计方法:修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草
剂_________填“敏感”或“不敏感”),或使靶蛋白过量表达，植物吸收除草剂后仍能____________。
（4）将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行_________________。
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鸡干抗素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①-④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_____________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了______________和_____________序列，以便于后续的剪切和连接。
(2)步骤②所构建的基因表达载体中末标注出的必需元件还有_______________________，步骤③中需先用__________________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是_________________________。
(4)用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数(植物受病毒侵染的严重程度)为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79，说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有_______________________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了________和________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是：Ti质粒内，每种限制酶有________个切割位点，酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列_______(相同/不相同)
(2)步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有________，步骤③中需先用________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）表格中的限制酶EcoRⅠ切割DNA分子后形成的黏性末端是_________________。
（2）步骤①是利用PCR技术扩增鸡干扰素基因，进行PCR的前提是___________。
（3）图中选用两种限制酶分别处理鸡干扰素基因和农杆菌Ti质粒，这样做的优点有_________。
（4）步骤②所构建的基因表达载体中启动子的作用是 ____________。
（5）步骤③中需先用____________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（6）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是__________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了__________和__________序列，以便于后续的剪切和连接，一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有__________个。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是__________。
A. Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
B. 目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C. 酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D. 酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有__________，步骤③中需先用__________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过__________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了________和________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是：Ti质粒内，每种限制酶有________个切割位点，酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列_______(相同/不相同)
(2)步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有________，步骤③中需先用________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是____。科研人员还在两种引物的一端分别加上了__________和___________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是_________。
A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有___________，步骤③中需先用______处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是___________。
（4）用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79。说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有__________。
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目前已成功利用基因工程技术培育出马铃薯新品种。请根据教材中知识回答下列问题：
（1）马铃薯易患的多种疾病，可导致其产量下降。通过导入抗病基因并使该基因表达可以提高马铃薯产量，基因工程中使用最多的抗病基因是病毒外壳蛋白基因和___________。
（2）由于受体细胞不同以及将目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建_______（填“完全相同”或“有所差别”）。
（3）马铃薯是双子叶植物，常用__________法将目的基因导入马铃薯体细胞中。将病毒外壳蛋白基因转入普通马铃薯植株细胞内并成功表达的过程，在基因工程中称为__________。
（4）科学家还培育出了抗除草剂转基因马铃薯，其设计思路是修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草剂________（填“敏感”或“不敏感”），或使靶蛋白过量表达，植物吸收除草剂后仍能__________。
（5）将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行目的基因的检测与鉴定，一般要进行______水平和个体水平的鉴定。