科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如下图1：（...

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图1所示，图2、图3分别表示了干扰素基因及质粒的相关信息。

（1）图1中步骤①的技术名称是_____________。

（2）图1步骤③将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有_____________。

（3）图1步骤③中，需要构建含有干扰素基因的_____________，据图2、图3，对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用的限制酶组合为_____________。

（4）为了得到实验所需的大量干扰素基因，研究人员利用PCR技术进行扩增。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，因此可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_____________作为引物。若要将1个干扰素基因复制4次，则需要在缓冲液中至少加入_____________个引物。

（5）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发_____________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_____________方法进行检测。

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科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如下图。请回答相关问题：

(1)过程①获得重组胚胎之前，需要通过____________技术获得重组细胞。

(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞，是因为__________________。

(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________。由于DNA复制时，子链只能由5′向 3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_______________作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为________________或_______________。

(4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_____________的方法。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是　　　　　　　　 。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有　　　　　　　　　　 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的 　　　　　　　　　　 。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为　　　　　　　　 或　　　　　　　　　　 。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发　　　　　　 色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用　　　　　　　 　　 的方法。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是　　 。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有　　 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的　　　 。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取　　　　　　　 作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为　　 或　　 。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发　　 色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用　　 的方法。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是　　　　　　　　 。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有　　　　　　　　　　 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的 　　　　　　 。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取　　　　　 作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为　　　　　　　　 或　　　　　　　　　 。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发　　　　　　 色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用　　　　　　　　　　　 的方法。

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（12分）科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）过程①获得重组胚胎之前需要通过__________________技术获得重组细胞，接受细胞核的去核卵母细胞应该处于___________________时期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_______________分离出ES细胞。步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________________。构建之前可以利用_____________________技术对目的基因进行扩增。

（3）将基因导入ES细胞常用的方法是________________________。体外诱导ES细胞向不同方向分化是利用了ES细胞的_________________。

（4）为检测干扰素基因的表达情况，可采用__________________方法，若有杂交带出现，表明目的基因已成功表达。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如下图1：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的　　　　 ．

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为　　　　 ．

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的　　　　 ．构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取　　　　 作为引物．对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为　　　　 ．

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发　　　　 色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用　　　　 的方法．

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_______。

（2）分离获取ES细胞可以是来自早期胚胎的哪些阶段的哪些细胞？___________

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的_________。构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取______作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为__________。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发_____色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_______的方法。

（5）科学家正在通过蛋白质工程技术将干扰素分子中的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可以在不影响其活性的前提下延长其保存周期。这项技术是以_________________为基础而进行的操作。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如下图。请回答相关问题：

（1）图1中用到了______（写三项即可）等现代生物技术。

（2）由图1可知，步骤②中要分离出ES细胞，需将重组胚胎培养到______（时期）。将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞，是因为ES细胞在功能上具有______。

（3）步骤③中，先需要利用PCR技术扩增干扰素基因。可以根据______合成引物，据图2分析，对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为______。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发______色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可用的检测物质是______（填“标记的干扰素基因”或“干扰素的抗体”）。

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科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

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