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pBV220载体是我国预防医学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp(bp表示碱基对），其结构如图所示。图中PRPL是启动子，rmB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题：
（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有___________、_____________。
（2）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得1个300bp, 1个400bp和1个2966bp片段，B和C同时切割得2个200bp和1个3266bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为_____，C的两个切割位点与A点的最短距离分别_____、____。
（3）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是_____________，溫控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活。促进工程菌目的基因表达的诱导温度为_________。
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pBV220载体是我国预防医学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp(bp表示碱基对），其结构如图所示。图中PRPL是启动子，rmB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题：
（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有___________、_____________。
（2）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得1个300bp, 1个400bp和1个2966bp片段，B和C同时切割得2个200bp和1个3266bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为_____，C的两个切割位点与A点的最短距离分别_____、____。
（3）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是_____________，溫控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活。促进工程菌目的基因表达的诱导温度为_________。
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pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3 666 bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示。图中PRPL是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题：
（1）基因工程的核心步骤是____________________________________。
（2）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有________、________。
（3）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500 bp和1个2 666 bp片段，B和C同时切割得2个250 bp和1个3 166 bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为________，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为________、________
（4）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是________。温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活。促进工程菌目的基因表达的诱导温度为________。
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pBV220质粒是被广泛应用的大肠杆菌载体，结构如下图所示。其中PRPL是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、Pst Ⅰ均为限制性内切酶。回答下列问题：
（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有________________。
（2）将目的基因与此质粒构建基因表达载体时，通常用图中____________两种限制酶切割此质粒，其优点是______________________。用这两种酶可以切开此质粒的_____个磷酸二酯键，并且会____（填“消耗”或“产生”）同样数量的水分子。
（3）将构建好的基因表达载体导入大肠杆菌前，需用__处理大肠杆菌，使之成为________细胞，以提高转化效率。目的基因是否成功导入大肠杆菌，可采用___________进行检测。
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疫苗和抗体已被广泛应用于预防与诊疗传染性疾病的过程，已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如下图所示，请回答下列问题：
（1）③构建A基因重组载体时，启动子是重新构建的，它应该能被受体细胞的________所识别，以便于其催化转录过程。
（2）下图为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域转录产生的能指导蛋白质合成的mRNA中A和U的总数是_______个。
（3）在给小鼠皮下注射A蛋白质时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的_______数目。过程⑥的实质为_______。
（4）在将X进行扩大培养前，至少需要经过_______次筛选，其中包括_______和_______，扩大培养的原理是_______。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的_______来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的_______与分离中的病毒进行特异性检测。
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（10分）人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体（见图1）。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答：
（1）此质粒的化学本质是________，它可以作为多种目的基因的（运）载体，原因是________。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是。
（2）人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。
①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据________推出
________序列，再推出________序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与________重组后，再导入大肠杆菌内。
② 在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少________，不能。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择________作为受体细胞。
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人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体(见图1)。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答问题：
(1)此质粒的化学本质是___________，它可以作为多种目的基因的(运)载体，原因是 。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是________________________________________________________________________。
(2)人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。
①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据________推出________序列，再推出________序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与________重组后，再导入大肠杆菌内。
②在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少________，不能________。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择________________作为受体细胞。
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鸡干抗素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①-④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_____________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了______________和_____________序列，以便于后续的剪切和连接。
(2)步骤②所构建的基因表达载体中末标注出的必需元件还有_______________________，步骤③中需先用__________________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是_________________________。
(4)用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数(植物受病毒侵染的严重程度)为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79，说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有_______________________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了________和________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是：Ti质粒内，每种限制酶有________个切割位点，酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列_______(相同/不相同)
(2)步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有________，步骤③中需先用________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）表格中的限制酶EcoRⅠ切割DNA分子后形成的黏性末端是_________________。
（2）步骤①是利用PCR技术扩增鸡干扰素基因，进行PCR的前提是___________。
（3）图中选用两种限制酶分别处理鸡干扰素基因和农杆菌Ti质粒，这样做的优点有_________。
（4）步骤②所构建的基因表达载体中启动子的作用是 ____________。
（5）步骤③中需先用____________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（6）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________________。