生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为...

生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。如果向含有纤维素培养基中加入刚果红染液时，刚果红会与纤维素形成红色复合物，而呈现红色，如果纤维素被降解，则培养基表面会形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。　请分析回答下列问题：

71、纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择________环境采集土样。

②配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行________，接种前要进行________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是________ 。

③以下是两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择________(填编号) 培养基配方，从功能看该培养基属于________培养基。

④为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用________　　 法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________　 的菌落作为菌种进行扩大培养。

72、进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用酶固定化技术，其具体方法包括如下图所示的三种，则①表示________、②表示________、③表示载体结合法。

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A．(生物技术实践，9分)生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→-成品。

(1)纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择怎样的环境采集土样? ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

②以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaN031g、Na2HP04。7H201.2g、KH2P040.9g、MgSO4·7H2O0.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g(蒸馏水定容到1000ml)。该

培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入________________________________________________________________________________________________ 染液，

将筛选获得的茵液稀释后用 ________________________________________________________________________________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养。

④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?请设计实验进行检测。________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

(2)乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是 ________________________________________________________________________________________________________________________。

(3)发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质? ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

B．（现代生物科技，9分）下图是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，请分析回答：

（1）在基因工程的操作程序中，基因工程的核心是________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 。

（2）在获取目的基因和构建目的基因表达载体的一个目的基因表达载体的组成包括标记基因和  ________________________________________________________________________________________________________________________________   ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________。

（3）一般将受精卵作为目的基因的受体，将目的基因导入受精卵常用的方法C称________________ 　________ 法。

（4）流程A和B分别指________________________________________________________________________________ 和________________________________________________________________________ 。

（5）农场放牧要考虑环境承载力，牛粪可以用于沼气生产，它们分别应用了生态工程的_____和__________原理。

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生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化让产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

（1）最好选择怎样的环境采集土样？________。

（2）以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaNO₃ 1g、Na₂HPO₄•7H₂O 1.2g、KHPO₄ 0.9g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000ml）。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是________。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入____染液，将筛选获得的菌液稀释后用________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（4）纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢？在生产中需要定量检测，请提出定量检测纤维素酶含量的实验思路。____________。

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生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精。它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料。我国成功利用农作物废弃物—秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产。其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏。

（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入_______________的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖。从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过_______________法直接筛选出该微生物。

（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用______________法接种到平板上。如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为____________，通常运用该方法统计出的菌落数目______（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是__________________________________________________。

（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是___________，该微生物在_______________的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

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生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精。它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料。我国成功利用农作物废弃物—秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产。其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏。

（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入_______________的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖。从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过_______________法直接筛选出该微生物。

（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用______________法接种到平板上。如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为____________，通常运用该方法统计出的菌落数目______（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是__________________________________________________。

（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是___________，该微生物在_______________的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

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生物乙醇是汽油的良好替代品，美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮，不与粮争地”的原则，利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料，其主要技术流程为：

秸秆→秸秆颗粒反应罐水解压滤出渣酒精发酵蒸馏

（1）过程①加入了微生物，其作用是把秸秆颗粒分解。从土壤中获取①所需微生物的过程 称为微生物的_________，选择培养基应以__________为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液用_______法或　　　　　　　　　　　　 法接种到培养基上。

（2）酒精发酵阶段接种的微生物是______________，生产酒精要控制的必要条件是　　　　　　　　 。

（3）在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是________________、__________________。

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[生物——选修1：生物技术实践] 已知微生物甲可以分解纤维素，微生物乙发酵可以产生乙醇。利用微生物甲和乙可以将农作物秸秆等原料生产燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖。回答下列问题：

（1）在分离微生物甲的操作中，通过______________增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。

（2）为从富含纤维素的土壤中分离获得微生物甲的单菌落，某同学设计了一个培养基（成分见下表）：

注：“+”表示有，“－”表示无。

据表分析，该培养基含有微生物所需的_______四大类营养物质。该培养基__________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______________。

（3）一同学在某一稀释度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为33、212和256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值167作为统计结果。该做法__________（填“正确”或“不正确”）。

（4）微生物乙的发酵产物，可用_____________进行检验。对微生物乙的优良菌种进行长期保存，可以采用_______________的方法。

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（2012•泰安二模）【生物一生物技术实践】

乙醇是汽油的良好替代品．利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，其主要技术流程为：

①秸秆→秸秆碎屑反应罐水解压滤出渣酒精发酵真空分馏

（1）过程①可以加入微生物，从土壤中获取所需微生物的过程称为微生物的 分离 ．纯化菌种时，将选择培养获得的菌液稀释后用 稀释涂布平板 法接种到培养基上，并用 刚果红染色 法筛选纤维素分解菌．

（2）过程①也可以加入纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括 Cx酶、C1酶和葡萄糖苷酶 三种组分．生产实践中，可采用 化学结合（或物理吸附） 法制成固定化纤维素酶，从而实现酶的重复利用．

（3）酒精发酵阶段接种的微生物是 酵母菌 ，其在 无氧 条件下进行酒精发酵．接种前，对培养基进行灭菌的常用方法是 高压蒸汽灭菌 ．

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［生物—选修1：生物技术实践1］

利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇。图23为生产燃料乙醇的简要流程图，请据图回答：

（l）微生物A能分泌纤维素酶，其中的葡萄糖苷酶可将_______分解成葡萄糖。

（2）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、__________四类，欲从土壤中分离获取微生物A，应采用以纤维素为唯一碳源的培养基，其原因是______。

（3）图中②过程常用的微生物是__________，此时其细胞呼吸类型是__________。

（4）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________计数板直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 　　　　 法进行计数。某同学用0．1 mL稀释液在稀释倍数为106的平板中测得菌落数的平均值为126，则每毫升样品中的细菌数是__________个。

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利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，生产过程中可采用微生物将秸秆水解或用酶水解，其主要技术流程如下图所示，下列相关说法错误的是

A. 酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌

B. 过程①加入的是葡萄糖苷酶

C. 酒精发酵接种的酵母菌需在无氧条件下发酵

D. 可用刚果红染色法筛选过程①所需的纤维素分解菌

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