下图为用于基因工程的一个质粒示意图。用EcoRI限制酶切割目的基因和该质粒，再用DNA连接...

下图为用于基因工程的一个质粒示意图。用EcoRI限制酶切割目的基因和该质粒，再用DNA连接酶连接形成重组质粒，然后导人大肠杆菌，最后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a一无抗生素的培养基，b一含四环素的培养基，c一含氨苄青霉素的培养基，d一含四环素和氨苄青霉素的培养基。  含重组质粒的大肠杆菌能生长的是    (    )

A．a    B．a和c        C．a和b     D．b和c

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为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。

下列操作与实验目的不符的是

A. 用限制性核酸内切酶EcoRI和DNA连接酶构建重组质粒

B. 用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞

C. 在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞

D. 用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上

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根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）质粒运载体用EcoRI切割后产生的片段如下：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRI切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和T₄DNA连接酶。

（3）反转录作用的模板是________，产物是________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。

（4）基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是________。

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下列有关基因工程的叙述，正确的是

①该技术将导致定向变异  ②该技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体 ③蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供依据 ④限制酶只用于获得目的基因 ⑤重组质粒的形成是在细胞内完成的 ⑥只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达 ⑦该技术的遗传学原理是基因重组 ⑧天然质粒可直接应用于基因工程的操作

A.①②③           B.①④⑧          C.②⑤⑥           D.①③⑦

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下图所示，若用两种识别切割序列完全不向的限制酶E和P从基因组DNA上切下目的基因,并将之取代质粒pZHZl（3．7kb, lkb=1000对碱基）上相应的E—F 区域（0．2kb）V，那么所形成的重组质粒 pZHZ2

A．既能被E也能被F切开　　　　　　　　 B．能被E但不能被F切开

C．既不能被E也不能被F切开　　 　　 D．能被F但不能被E切开

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下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

① 画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？　　　　 理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）以上图示中基因工程的核心是　　　　 （用序号表示）,除了目的基因和标记基因外,其上还应包括_____________和_____________。

（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是　　　　　　　 。目的基因能否在受体母猪体内稳定遗传的关键是　　　　　　　　　　　　　　　　　 。这需要检测才能确定，检测采用的方法是_____________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：　　　　　　　 （用数字表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）

④表达出蓝色荧光蛋白

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为了构建重组质粒pZHZ2，可利用限制酶E、F切割目的基因和质粒pZHZ1，后用相应的酶连接。据图回答，下列叙述中错误的是（　　 ）

A. 基因工程的核心就是构建重组DNA分子

B. 质粒pZHZ2上存在RNA聚合酶结合的位点

C. 重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开

D. 质粒pZHZ1、pZHZ2复制时一定会用到DNA聚合酶

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为了构建重组质粒pZHZ2，可利用限制酶E、F切割目的基因和质粒pZHZ1，后用相应的酶连接。据图回答，下列叙述中错误的是(　 )

A. 基因工程的核心就是构建重组DNA分子

B. 质粒pZHZ2上存在RNA聚合酶结合的位点

C. 重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开

D. 质粒pZHZ1、pZHZ2复制时一定会用到DNA聚合酶

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为了构建重组质粒pZHZ2，可利用限制酶E、F切割含目的基因的DNA片段和质粒pZHZ1，然后用相应的酶连接。据图分析，下列叙述中错误的是（　　 ）

A.重组质粒pZHZ2上存在复制原点

B.基因工程的核心是构建基因表达载体

C.重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开

D.质粒pZH71、pZHZ2复制时会用到DNA聚合酶

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下列有关基因工程相关工具的描述，正确的是(　)

A. 限制酶能识别并切割DNA任意序列

B. DNA连接酶与Taq酶作用位点不同

C. 没有与目的基因重组的质粒也可以进入受体细胞

D. 使用质粒运载体可以避免目的基因在受体内被分解

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