（16分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1的a过程目的是获得 ，b的接种方法为 。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（ 通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，有人对此做出了推测：A2、A5组芽孢杆菌虽发生了基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
③将凝乳酶催化能力最强的菌株分离纯化后进行扩大化培养，尽管培养基成分合适、操作正确、培养温度和pH适宜，但凝乳酶的产量比预期偏低。对此，研究人员展开了讨论，认为还有其他因素，如 ，请设计一个实验方案对此因素进行探究（实验方案用表格的形式呈现）。
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力，操作过程如图所示。请分析回答：
（1）图所示紫外线照射的原理是________，接种用的平板培养基________（是、不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10％脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U），凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图所示，酶催化能力最强的是________组。
②A2、A5组酶活力单位与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测。
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，因为基因突变具有________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是________________。为了验证上述2位同学的假设，可采用________________技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取________________，再反转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因，有时需要在引物的起始端设计________（限制酶、DNA连接酶、RNA聚合酶）识别序列，以便构建重组DNA分子。
②构建重组DNA分子（如图所示）最好选用________________限制酶（填酶的名称），理由是________________。
③工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉生产，毛霉作为受体细胞的优势是___________________________________________________________________。
④研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤依次有________。
a．蛋白质的结构设计
b．蛋白质的结构和功能分析
c．蛋白质结构的定向改造
d．凝乳酶基因的定向改造
e．将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞
f．将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产
凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得______，接种用的平板培养基______（是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是______组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有___________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是______。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用______限制酶。
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（16分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1的a过程目的是获得 ，b的接种方法为 。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（ 通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，有人对此做出了推测：A2、A5组芽孢杆菌虽发生了基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
③将凝乳酶催化能力最强的菌株分离纯化后进行扩大化培养，尽管培养基成分合适、操作正确、培养温度和pH适宜，但凝乳酶的产量比预期偏低。对此，研究人员展开了讨论，认为还有其他因素，如 ，请设计一个实验方案对此因素进行探究（实验方案用表格的形式呈现）。
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（18分，每空2分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得 ，接种用的平板培养基 （是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有 的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述2位同学的假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取 ，再逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因。
②构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用 限制酶。
③研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有 。
a. 蛋白质的结构设计 b. 蛋白质的结构和功能分析
c. 蛋白质结构的定向改造 d. 凝乳酶基因的定向改造
e. 将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞 f. 将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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回答有关微生物的问题．
Ⅰ、凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶．培育产高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向．图1为产高酶活力凝乳酶的枯草芽孢杆菌培育过程．
（1）枯草芽孢杆菌的芽孢是__________．
A．休眠体 B．营养繁殖体 C．孢子 D．营养体
（2）图1所示的b过程的目的是为__________，接种用的平板培养基在制备时需注意的是__________（多选）．
A．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
B．倒好的培养基和培养皿要进行高压灭菌处理
C．等到平板培养基冷却凝固后才可以盖上培养皿的皿盖
D．待平板冷却凝固约5﹣10min后将平板倒过来放置
Ⅱ、在35℃、40分钟内能凝固1mL10%奶粉所需的酶量为一个酶活力单位（U）．图2表示图1中提取得到的各种凝乳酶活力检测结果．
（3）据图2所示，酶催化能力最强的是__________组，而各组酶催化能力存在差异的原因是__________．
（4）A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
①同学甲：A2、A5组芽孢杆菌可能未发生基因突变，用__________技术检测即可证实．
②同学乙：A2、A5组与A0组酶活力虽然相同，但也可能存在不同的基因突变，理论上的解释是__________．
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回答有关微生物的问题．
Ⅰ、凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶．培育产高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向．图1为产高酶活力凝乳酶的枯草芽孢杆菌培育过程．
（1）枯草芽孢杆菌的芽孢是__________．
A．休眠体 B．营养繁殖体 C．孢子 D．营养体
（2）图1所示的b过程的目的是为__________，接种用的平板培养基在制备时需注意的是__________．
A．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
B．倒好的培养基和培养皿要进行高压灭菌处理
C．等到平板培养基冷却凝固后才可以盖上培养皿的皿盖
D．待平板冷却凝固约5﹣10min后将平板倒过来放置
Ⅱ、在35℃、40分钟内能凝固1mL10%奶粉所需的酶量为一个酶活力单位（U）．图2表示图1中提取得到的各种凝乳酶活力检测结果．
（3）据图2所示，酶催化能力最强的是__________组，而各组酶催化能力存在差异的原因是__________．
（4）A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
①同学甲：A2、A5组芽孢杆菌可能未发生基因突变，用__________技术检测即可证实．
②同学乙：A2、A5组与A0组酶活力虽然相同，但也可能存在不同的基因突变，理论上的解释是__________．
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。如图表示EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点．回答下列问题：
（1）根据图中EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是_____，将切割后的质粒和目的基因连接起来需要_____酶．构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是_____识别和结合的部位。
（2）工业化生产过程中，若采用重组大肠杆菌生产凝乳酶，该过程中将目的基因导人大肠杆菌前，常常用_____处理细胞，使之处于一种能吸收周围环境中的DNA分子的生理状态，这种细胞称为_____细胞。
（3）研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_____。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是_____。
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凝乳酶是干酪和干酪素生产过程中的关键酶，动植物及微生物均能产生。由于微生物资源丰富、生长周期短，受气候等因素限制小等特点，微生物凝乳酶成为研究热点。为获得凝乳酶高产菌株，科研人员进行了以下分离、筛选、鉴定工作。
培养基配方表：
（1）从作用上看，该培养基属于______________（填“选择”或“鉴别”）培养基。
（2）科研人员将牧区采集的土壤样品放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行______________，用________________法接种于上述培养基上。接种后的培养基以______________状态放入培养箱。
（3）在涂布接种前，科研人员随机取若干灭菌后的空白平板先进行培养了一段时间，这样做的目的是_____________________________________。
（4）在稀释倍数为106倍下涂布了三个平板（每次取0.1mL），统计菌落数分别为240、250、260，则稀释前1mL菌液中所含此菌数量为_________________。
（5）挑选菌落时以白色沉淀圈大且透明圈小者为佳。将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_____________（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的凝乳酶。将一定量的粗提凝乳酶与适量酪蛋白溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将__________与等量酪蛋白溶液混合，作为实验的对照。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】奶酪生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌。请结合下图回答：
（1）利用PCR技术扩增目的基因原理与细胞内DNA复制类似（如左图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含ATP和Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和___________。
（2）为了食品安全，右图所示的表达载体需用___________酶切除抗性基因的部分片段，再用___________酶使表达载体重新连接起来。选用缺失URA3基因的酵母菌作为受体细胞（必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活），为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，所使用的培养基___________（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶。
（3）工业生产过程中，选用大肠杆菌作为受体细胞不能正常表达出凝乳酶，而选用酵母菌则能，原因是酵母菌含有______________________。
（4）测定凝乳酶基因转录的mRNA序列，测得从起始密码子到终止密码子之间的序列为1201个碱基，经判断这段序列的测定是错误的，为什么？_______________________。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用___________法将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵。受体细胞不选用体细胞的理由是______________________。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行___________，目的是确定要培育的个体能产牛奶。
③可采用抗原-抗体杂交法来鉴定转基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。该方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的单克隆抗体，请写出制备该抗体的实验思路___________。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力強而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过___________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有肘需要在引物的5’端设计___________（填“限制酶”/“DNA连接酶”/“RNA聚合酶”）的识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用___________作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，应直接改造的是___________（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。
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