[生物——选修3:现代生物科技专题]将北极深海鲽鱼科的抗冻基因（AFP）转入番茄，可获得耐低温的抗冻番茄，抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到C区和B区染色加深。如图为抗冻番茹的培育流程，请回答下列问题：
（1）①过程为基因工程操作程序中的第二个步骤____________，将AFP基因和切开的Ti质粒连接成重组质粒需要____________酶，通常将AFP基因插入Ti质粒的____________上，有利于目的基因在受体细胞中稳定维持和表达。
（2）②过程采用最多的方法是____________，除此之外，还有____________（答出两种），③过程应用的主要技术是____________。
（3）可通过聚丙烯酰肢凝胶电泳检测抗冻植株中的可溶性蛋白，若____________，则表明AFP基因已表达成蛋白质产品；也可采用____________进行个体生物学水平的检测。
高三生物非选择题困难题
[生物——选修3:现代生物科技专题]将北极深海鲽鱼科的抗冻基因（AFP）转入番茄，可获得耐低温的抗冻番茄，抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到C区和B区染色加深。如图为抗冻番茹的培育流程，请回答下列问题：
（1）①过程为基因工程操作程序中的第二个步骤____________，将AFP基因和切开的Ti质粒连接成重组质粒需要____________酶，通常将AFP基因插入Ti质粒的____________上，有利于目的基因在受体细胞中稳定维持和表达。
（2）②过程采用最多的方法是____________，除此之外，还有____________（答出两种），③过程应用的主要技术是____________。
（3）可通过聚丙烯酰肢凝胶电泳检测抗冻植株中的可溶性蛋白，若____________，则表明AFP基因已表达成蛋白质产品；也可采用____________进行个体生物学水平的检测。
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[生物——选修3:现代生物科技专题]科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程,含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：
（1）若要获得抗冻基因,可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白 的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用 技术进行扩增。
⑵上述两种途径获得的抗冻基因 （填“是”或“否”）一定相同，原因是 。
（3）用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是 。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用 酶对外源DNA、质粒进行切割。
（4）图中过程⑤表示 。
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（12分）【生物—现代生物科技专题】
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图，图二为质粒限制酶酶切图谱。鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列，Ampr为抗氨苄青霉素基因，其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）获取鱼的抗冻蛋白基因途径主要有 。为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的 之后 。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的 过程。
（2）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。该酶的特点 。在此实例中，应该选用限制酶 切割。
（3）要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有 作为标记基因。
（4）研究人员通常采用 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】科学家利用PCR技术分别从抗根结线虫的番茄和辣椒中克降抗性基因SIMi及Ca-Mi,并利用遗传转化方法将它们转入对根结线虫敏感的番茄中，获得抗根结线虫的番茄转基因株系应用于植物抗根结线虫育种。请回答相关问题：
(1）PCR技术是扩增目的基因的常用手段。扩增过程中，目的基因DNA__________后解链为单链，______与单链相应互补序列结合，在酶的作用下进行延伸。
(2)_________是实施基因工程的核心。
(3)将目的基因转入对根结线虫敏感的番茄中，最常用的方法是______________。通过转化，目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内__________________。
(4)为了检测对根结线虫敏感的番茄中是否插入目的基因，可采用_____________技术。检测目的基因在分子层面是否表达则可以用______________的方法。
(5)为了比较两种抗性基因（SIMi和CaMi)在转基因后的抗根结线虫的效果，可分别取等量的两种成功表达的转基因番茄植株___________，比较其抗虫效果。
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【生物一现代生物科技专题】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄理科的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、sma II 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr 为抗氨苄青霉素基因），其中①——④ 是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：
（l）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶，分别对________进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体I 中含有________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的________过程。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：
（1）基因工程的核心步骤是 。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入到 上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中 上。
（2）推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是 ，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则 。
（3）方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与 的启动子等调控组件重组在一起。该方案中
的早期胚胎在移植人受体母牛子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定一般是取处于 时期的 细胞进行检测。
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【生物——选修3:现代生物科技专题】
生长激素能促进人的生长，且能调节体内的物质代谢，将该基因转入奶牛，可获得转基因奶牛，以实现批量生产生长激素，满足医疗需求（如图所示）。请结合图示回答下列问题：
（1）获得人的生长激素基因的方法有从基因文库中获取、_______、_______等。
（2）在构建重组质粒的过程中，用_______切割含人生长激素基因的DNA分子，以获取目的基因。人的生长激素基因之所以能“嫁接”到牛染色体的DNA上,原因是_________。
（3）将人的生长激素基因导入牛受体细胞，常用方法是________。进行基因转移时，通常要将外源基因转入_______(细胞）中，一般可采用_______技术检测外源基因是否插入了牛的基因组。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是____________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】（15分） 。
已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。
回答下列问题：
（1）为了获得丙中蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙中蛋白质的________序列，据此可利用________方法合成目的基因。获得丙中蛋白质的基因还可用________、________方法。
（2）在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需使用________
酶和________。
（3）将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗________的危害。
（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，则该植株的种子
________（填“含有”或“不含”）丙种蛋白质基因。
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【生物——选修3 现代生物科技专题】科学家将拟南芥的抗寒基因（CBFl），转入香蕉以获得抗寒的香蕉品种。下图是某质粒载体上的Aac I、Xba I、EcoR I、Hind III四种限制酶的切割位点示意图。
据图回答问题：
（1）在该实验中为构建基因表达载体，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，对质粒载体进行切割的限制酶是___________，理由是___________。
（2）连接CBFl基因到该质粒载体后，作为基因表达载体的组成还必须有___________。将重组质粒导入香蕉细胞最用的方法是___________。
（3）为了鉴别受体细胞中是否含有CBFl基因，可用含___________的培养基进行筛选。
（4）科学家将生长健壮、苗龄一次的转基因香蕉（实验组）与非转基因香蕉（对照组）进行___________处理，鉴定两组之间的抗寒性差异，如果___________，则说明获得了抗寒的香蕉优质品种。
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[选修3——现代生物科技专题]
SOD（超氧化物歧化酶）是一种特异性酶，与细胞损伤、衰老和死亡密切相关。实验小组将SOD基因转入胡萝卜中，并获得转基因胡萝卜脱毒苗快速繁殖体系。请回答下列问题：
（1）常用____________技术来扩增获得的目的基因，该过程所需的原料是____________。从酶的角度阐述该技术和细胞内遗传物质复制过程的不同点是________________________。
（2）离体的胡萝卜组织细胞经过_____________、_____________两个阶段培育成幼苗。
（3）微型繁殖无病毒胡夢卜时，常选取根尖作为外植体，其依据是___________。微型繁殖技术能保持品种的______________________。
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