下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因),其中①、④表示相关的操...

下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因）,其中①、④表示相关的操作步骤,甲、乙表示相关结构或细胞。PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是（　　 ）

A．图中甲代表的是基因表达载体,乙可代表番茄细胞

B．可用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C．若用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因）,其中①～④表示相关的操作步骤,甲、乙表示相关结构或细胞。PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是

A．图中甲代表的是基因表达载体,乙可代表番茄细胞

B．可用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C．若用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因),其中①、④表示相关的操作步骤,甲、乙表示相关结构或细胞。PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是(　 　 )

A.图中甲代表的是基因表达载体,乙可代表番茄细胞

B.可用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C.若用PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D.图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①、④表示相关的操作步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。Pst I酶和Sma I酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是

A.图中甲代表的是基因表达载体，乙可代表番茄细胞

B.可用PstI酶和SmaI酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C.若用PstI酶和SmaI酶同时完全切割质粒产生的DNA片段有3种

D.图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①、④表示相关的操作步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。Pst I酶和Sma I酶切割基因后将产生同的粘性末端。据图分析下列说法错误的是

A．图中甲代表的是基因表达载体，乙可代表番茄细胞

B．可用Pst I酶和Sma I酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C．若用Pst I酶和Sma I酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图。（其中 ampr 为抗氨苄青霉素基因）下列叙述正确的是（　　 ）

A.可同时选用限制酶 PstI、Sma I 对含目的基因的 DNA 进行切割

B.过程②中，可直接将过程①得到的产物注入受体细胞

C.过程①可以作目的基因“分子运输车”的是天然质粒

D.过程④中，若利用探针在试管苗细胞内检测到目的基因，则转基因成功

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下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图(其中ampr为抗氨苄青霉素基因)。下列叙述不正确的是(　　 )

A.可同时选用限制酶PstI、Sma I对含目的基因的DNA进行切割

B.过程②可采用农杆菌转化法将含目的基因的表达载体导入受体细胞

C.质粒上的抗性基因有利于筛选含目的基因的细胞和促进目的基因的表达

D.图中过程④可以利用放射性同位素标记的目的基因作为探针进行筛选

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

(1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是______________________。

(2)据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶________切割目的基因和质粒。

(3)从cDNA文库中获得的目的基因________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

(4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是________。

(5)为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用Hind Ⅲ酶或Kpn Ⅰ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166 bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与Hind Ⅲ酶切割位点最短长度为________bp。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

（1）图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B,其中不用质粒A原因是____________________________________。

（2）据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶_____切割目的基因和质粒。

（3）从cDNA文库中获得的目的基因______（填“含有”或“不含有”）启动子和终止子。

（4）在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子作用是________________________。

（5）图乙农杆菌中的质粒应含有______，其作用是携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA。从分子水平检测AFPs基因是否成功表达的方法是_____________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到______工程。

（6）为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为_______，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为_________。

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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下图中①～⑦是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ表示相关结构。请据图作答：

（1）获取“鱼抗冻蛋白基因”有几条途径，其中一条途径是以　　　　 为模板，在　　　　　 的催化下，合成互补的单链DNA，然后再合成双链DNA；另一条途径是从基因文库中获取，基因文库又可分为　　　 文库和部分基因文库（如：cDNA文库）。

（2）转基因过程中的核心步骤是①　　　　　 ，在此过程中使用的工具酶有　　　　　　 。鱼的抗冻蛋白基因必需插入到Ti质粒的　　　　　　　　 中才能整合到受体细胞的染色体DNA中，得到的结构Ⅰ上除了目的基因、标记基因外，还必须有　　　　　　 。

（3）步骤④～⑦应用了　　　　　　　　 技术，该技术的理论依据是　　　　　　 。其中⑤和⑥步骤分别叫做　　　　　　

　　　　　　　 和　　　　　　 。

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