I．为研究肝癌致病机理，利用下图所示方法和基因工程获取相关癌基因以进一步研究。
（1）上图中，A过程需要用________酶，D过程需要回收________（未杂交/杂交分子）的含32P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得________，并用其构建基因文库。
II．上图是治疗性克隆时获取病人胚胎干细胞的过程。
（2）细胞①是病人的体细胞（如皮肤细胞），细胞②往往是处于_________期的卵母细胞。图示方法一和方法二都使用了去核卵母细胞，主要是因为_____________________。
（3）将分离出的胚胎干细胞放入有分化诱导因子的培养液中，诱导其分化成所需类型细胞或器官，完成该过程的实质是____________________。对于先天不能生成T细胞的免疫缺陷病人，需要诱导产生_________（填免疫器官）。
高三生物非选择题困难题
I．为研究肝癌致病机理，利用下图所示方法和基因工程获取相关癌基因以进一步研究。
（1）上图中，A过程需要用________酶，D过程需要回收________（未杂交/杂交分子）的含32P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得________，并用其构建基因文库。
II．上图是治疗性克隆时获取病人胚胎干细胞的过程。
（2）细胞①是病人的体细胞（如皮肤细胞），细胞②往往是处于_________期的卵母细胞。图示方法一和方法二都使用了去核卵母细胞，主要是因为_____________________。
（3）将分离出的胚胎干细胞放入有分化诱导因子的培养液中，诱导其分化成所需类型细胞或器官，完成该过程的实质是____________________。对于先天不能生成T细胞的免疫缺陷病人，需要诱导产生_________（填免疫器官）。
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南极某种鱼含有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图。请回答下列相关问题：
(1)利用①过程的方法获取目的基因需要用到_________酶。②过程中常需要用到的工具酶是__________________。
(2)通过①②过程成功构建的重组质粒，除了目的基因外，此载体还应该具备___________________________等条件。
(3)将目的基因导入番茄体细胞的方法是利用农杆菌的_________作用，其原理是____________________________________。
(4)要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中正确表达，除了进行分子检测外，有时还需要进行___________________________的鉴定。
(5)若某科研机构从预期的抗冻蛋白功能出发，依靠人工方法合成了抗冻基因的mRNA，再重复上述过程该研究方法可称为__________________。
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如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）上图中采用的目的基因获取方法是___________技术，其中②过程需要___________酶才能完成。
（2）在培养转基因绵羊的过程中常用的受体细胞是___________，目的基因导入的方法是___________。其中在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO2，其主要作用是___________。在③过程中还需要用到的主要生物技术有__________________
（3）在抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是________________，要确定目的基因．（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定具体方法是：______________
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人类胰岛素基因位于第11号染色体上，长度8416 bp，包含3个外显子和2个内含子，人类胰岛素的氨基酸序列已知。回答相关问题：
（1）上图是利用PCR技术获取人胰岛素基因的方法，该过程在缓冲液中除了要添加模板和引物外，还需要添加的物质有_________，一个DNA分子经过5轮循环，需要引物A____个，从PCR的过程和DNA分子的特点，试着写出设计引物需要注意的问题（答出2点即可）_____________________________________________。
（2）基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的来源不同分为两类，其中“缝合”双链DNA片段平末端的是______________________，利用SDS-凝胶电泳分离不同DNA分子，迁移速度取决于____________________________。
（3）将获得的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，一般先用_______处理大肠杆菌细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于_________中与该类细胞混合，在一定温度下促进细胞吸收DNA分子完成转化过程。
（4）若利用图示方法获取的胰岛素基因，直接构建基因表达载体后导入大肠杆菌，能不能表达出人胰岛素，说明理由。___________________________________________。
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科学家利用转基因技术将人的高血压相关基因导入大鼠受精卵，培育遗传性高血压转基因模型大鼠，以研究遗传性高血压的致病机理及筛选有效的治疗药物。请回答：
(1)获得目的基因后，常利用____________技术在体外将其大量扩增。在构建基因表达载体的过程中，它的组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子和________________。
(2)将人的高血压相关基因导入受精卵中的最有效方法是___________。
(3)在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入___________等一些天然成分，还需要提供CO2以维持____________
(4)胚胎移植前应保证供体和受体的____________相同，所以要对受体鼠进行___________处理。用于胚胎移植的早期胚胎一般是___________。
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人类疾病的转基因生物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠（2N）制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）。
（1）在上述转基因大鼠的培育过程中，涉及的现代生物技术有____________（写出两项即可）。
（2）获得目的基因B的方法可以是化学方法人工合成，或是从____________获取，还可以用PCR技术扩增目的基因，PCR扩增的原理是____________，在扩增过程中，除需要游离的脱氧核苷酸，模板外，还需要的条件为________________________。
（3）子代大鼠如果检测到相应____________和出现____________，即可分别在分子水平和个体水平上，说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）进行①过程的卵母细胞已经处于____________期，受精过程中，防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和____________。过程⑤通常选择去核卵母细胞做受体细胞的原因除了卵母细胞体积大、易操作，营养物质丰富外，还因为它____________。
（5）将早期胚胎移植到代孕鼠体内时，代孕鼠对移入子宫的重组胚胎基本上不发生____________，这为重组胚胎在代孕母鼠体内的存活提供了可能。
（6）在构建的B基因的表达载体中，高血压相关基因的首端必须有____________，它是____________识别和结合部位，重组表达载体中标记基因的作用是____________。
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人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）。
（1）进行①过程之前，需对人工采集的精子进行 处理。完成②过程常采用的方法是 ，④过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的 。
（2）从人体细胞中获取基因B时用到的工具酶是 ，在构建的基因表达载体中，高血压相关基因的首端必须有 ，它是RNA聚合酶的识别和结合部位。
（3）图示中甲为 （时期）的去核卵母细胞，⑤过程操作技术叫做 。
（4）要在分子水平上检测成功导入的B基因在大鼠中是否成功表达，可采用 方法，如果高血压相关基因已在大鼠体内成功表达，可用其建立高血压转基因动物模型。
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如图是利用基因工程方法培育抗虫棉的过程．请据图回答相关问题：
（1）从苏云金芽孢杆菌的DNA上获取抗虫基因，需要用到的工具是 ，此工具主要是从 生物中分离纯化出来的，它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 链断开．
（2）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有 ，它能把目的基因整合到受体细胞的 上．
（3）E过程是利用 技术完成，要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体水平上还需要做 实验；若要检测具有抗虫基因的棉花是否产生了相应素蛋白，在分子水平上可利用 方法进行检测．
（4）在转基因绵羊培育过程中，可利用 法将目的基因导入到该种生物的 中．
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人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注:基因B为高血压相关基因）。
(1)进行①过程之前，需对人工采集的精子进行获能处理。获能的方法有培养法和
法。①过程中精子入卵后，卵细胞膜会立即发生___________,这是防止多精入卵的第二道屏障。
(2)高血成相关基因B在导入②之前需要 ，这是基因工程的核心。为保证基因B正确表达，应将其插入在_____和 之间。其中标记基因的作用是为了鉴别_________。
(3)④过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的_____。并且一般需将细胞置于含95%的空气加______的混合气体的培养箱中进行培养。
(4)圈示中甲细胞是 。其在核移植⑤之前需要进行去核处理，同时用微型吸管吸走________。
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下图为通过基因工程培育抗虫植物的过程，据图分析回答相关问题:
（1）抗虫基因的获取常用的方法有：从___________中获取，利用__________扩增，也可以用化学方法直接人工合成。
（2）①过程需要的酶有限制酶和__________。基因表迖载体构建的目的是使目的基因在_____中稳定存在，并且能够遗传给下一代。
（3）图中将目的基因导入植物细胞的方法是____________。可以用_________技术检测抗虫基因是否插入植物细胞中染色体的DNA上。
（4）②过程体现了植物细胞具有_________。若此抗虫基因为Bt毒蛋白基因，则其成功表达所体现的中心法则为：_________________________。
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