（四）生物工程图1是科学家用转基因（大鼠生长激素基因）方法培育“巨型小鼠”过程中的一个步骤...

（四）生物工程

图1是科学家用转基因（大鼠生长激素基因）方法培育“巨型小鼠”过程中的一个步骤。图2为3种质粒和1个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，都可以作为标记基因。复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关。

1.图1表示基因工程中的________（步骤），该步骤采用的技术方法是________。

2.据图2，为构建重组质粒，应使用限制酶________（Pvu Ⅰ / EcoR Ⅰ）进行切割。其中，质粒A、质粒C不能作为此目的基因运载体的原因是________。

3.在分离提纯限制酶EcoR Ⅰ的过程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是________。

A. 溶菌酶等酶解细菌细胞壁

B. 超声波、压力等

C. 改变pH或加入硫酸铵

D. 添加稳定剂和填充剂

4.研究人员用交联法固定化EcoR Ⅰ，用戊二醛作为交联剂，使酶交联在一起，限制酶的移动，如图3所示。但发现固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，其最可能的原因是戊二醛________。

A. 增加了酶的分子量

B. 改变了部分酶的活性部位的空间结构

C. 占据了酶的活性部位

D. 分解了部分的酶

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（8分）继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：

⑴获得目的基因的方法通常包括　　　　　　　　 和　　　　　　　　　　　　 。

⑵获得目的基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的　 处，DNA连接酶作用于　　　　 处。（填“a”或“b”）

⑶进行基因转移时，通常要将外源基因转入　　 中，原因是　　　　　　 　　　　　　　　　 。

⑷由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率　　　 ，所以在转化后通常需要进行 　　 操作。

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科学家设法将人的生长激素基因导入其他生物体（细胞）内，从而获取大量的人的生长激素，应用于侏儒症的早期治疗，如图所示．请据图回答下列问题．

（1）过程①采用的方法是　　　　 ，过程②之前需用　　　　 处理目的基因和质粒．

（2）过程③需事先对大肠杆菌用　　　　 处理，使其处于感受态，接着　　　　 ，从而完成转化过程．

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继乳腺生物反应器之后，科学家培育出了小鼠膀胱生物反应器，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答下列问题：

（1）该小鼠膀胱生物反应器的目的基因是__________　　 。

（2）将目的基因导入小鼠细胞时，通常用__________作为受体细胞，采用最多的导入方法是________。

（3）在该膀胱生物反应器中，应使目的基因在小鼠的__________细胞中特异表达。

（4）从小鼠的尿液中提取的人的生长激素，既可以用________（方法） 来检测，也可以与人体自身合成的生长激素的功能进行__________比较，以确定其是否与天然产品相同。

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阅读如下资料：

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家用农杆菌转化法培育出了转基因烟草。

资料乙：T4溶菌酶在温度较高时容易失去活性。科学家用对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。

回答下列问题：

（1）资料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠体内常用________　　　　　 ________ 法，受体细胞是　　　　　　　　 。在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，先将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的　　　　　　　　 上。

（2）资料乙中的技术属于________________________________　　　　 ________________ 工程的范畴，该工程是以分子生物学相关理论为基础，通过　　　　　　　　 或基因合成等方式，对原有蛋白质进行改造制造一种新的蛋白质的技术。该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶的肽链的　　　　　　　 序列发生了改变，其实质是　　　　　　　　　　 序列发生了改变。

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我国科学家通过基因工程成功培育出抗虫棉,大致过程如图所示。以下说法，错误的是

A．作为载体的Ti质粒必须具有标记基因以便于筛选

B．目的基因必须插入到Ti质粒的T-DNA上

C．目的基因最终会整合到植物的染色体DNA上

D．抗虫棉能够抵抗各种病虫害

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科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如下图，请据图回答：

（1）过程①表示采取　　　　 的方法来获取目的基因。

（2）形成图中②含有目的基因的DNA（重组质粒）需要的酶包括：　　　　　　　 。

（3）图中③过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，一般将受体大肠杆菌用

　　 处理，使细胞成为　　　　 ，从而使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。检测大肠杆菌B是否导入了质粒或重组质粒，可采用的方法是将得到的大肠杆菌B涂布在含有　　 的培养基上，若细菌能够生长，说明已导入了重组质粒或普通质粒A。

（4）基因工程的第四步中，检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上、检测目的基因是否翻译成蛋白质，用到的技术分别是　　　　　 、　　　　　 。

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金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，通过下图所示的方法培育出了抗枯萎病的新品种。相关叙述正确的是

A．图中①②在基因工程中依次叫做重组质粒、目的基因

B．形成③的操作中使用的酶有限制酶、DNA聚合酶和DNA连接酶

C．由④培育至⑤过程为植物组织培养

D．在⑤幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着成功培育新品种

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下列关于基因工程的叙述中，错误的是:

A. 基因工程常用的运载体包括细菌的质粒、噬菌体、动植物病毒

B. 将目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是用Ca2+处理细胞

C. 转基因羊在培育过程中还用到动物细胞培养技术和胚胎移植技术

D. 基因治疗是把有基因缺陷的细胞中的缺陷基因剔除后再导入健康的外源基因

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下列关于基因工程的叙述中，错误的是:

A．基因工程常用的运载体包括细菌的质粒、噬菌体、动植物病毒

B．将目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是用Ca2+处理细胞

C．转基因羊在培育过程中还用到动物细胞培养技术和胚胎移植技术

D．基因治疗是把有基因缺陷的细胞中的缺陷基因剔除后再导入健康的外源基因

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