木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白和其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木...

木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶,在食品工业上具有较高的潜在应用价值。

现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）取适量体积的样品涂布在富含_____的固体培养基上,置于65℃(原因是此温度是______）的培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落在培养基上用_____法接种培养，进行菌株的______。将得到的菌株接种到______（固体/液体）培养基中富集。

（2）将富集后的菌株接种于固体培养基上,待菌落长出后用0.1%的_______染色1h，再用lmol/L　 NaCl脱色。菌落周围会出现______，筛选_____的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白和其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶，在食品工业上具有较高的潜在应用价值。现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）实验中，接种环使用前后都在酒精灯上灼烧，其目的是______________________________。

（2）取适量体积的样品涂布在富含__________且其为唯一碳源的固体培养基上，置于恒温培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落并进行一系列操作，然后在培养基上用__________法接种培养，进行菌株的__________。最后将得到的菌株接种到__________（填“固体”或“液体”）培养基中富集。

（3）将富集后的菌株接种于固体培养基上，待菌落长出后用0.1%的__________染色1h，再用1mol/LNaCl脱色。菌落周围会出现__________，筛选__________的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）镉是工业废水中常见的污染物，对人休的伤害极大，我国环保法列为一类污染物。一些微牛物可以分泌多聚糖，糖蛋白，脂多糖，可溶性氨基酸等胞外聚介物质，这些聚合物具有络合或沉淀金属离子，从而起到净化工业废水中重金属盐的功能。某同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选镉降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）_________是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。

（2）镉降解菌富集培养基含有蛋白胨、镉、葡萄糖、水等物质，则其在进行灭菌时应控制压力在______。分离时应取不同浓度的稀释液_________ml涂也到平板上。

（3）下图为平板划线法分离纯化细菌，整个实验过程需要将接种环灼烧灭菌_____________次。

A.2　　　　 B.3　　　　 C.4　　　 D.5

（4）采用光电比色测定法检测降解后的废水中镉留量。在制备标准曲线实验过程，下表中1〜5号比色管的镉浓度应分别为_________。

最后分别以_________为横、纵坐标绘制曲线。

（二）生物技术己经渗入到了我们生活的方方面面。请回答下列有关动物细胞培养的相关问题：

（1）动物细胞培养的原理是_________，需要将培养瓶放入_________培养。

（2）培养过程中需要用胰蛋白酶消化组织中的_________。

（3）传代培养得到的细朐系往往具有_________核型。关于细胞系和细胞株下列说法错误的是（___）

A.原代培养得到的细胞也可以是细胞系

B.细胞株是特殊的细胞系

C.连续细胞系都获得了不死性

D.连续细胞系不一定都发生了转化

（4）细胞克隆又称为克隆培养法，它的最主要用途之一就是从普通细胞系中分离出_________突变会田胞系。

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【生物-选修3：现代生物科技专题】 嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展并得到了以下试验结果，如图。据图回答相关问题：

　　　 质粒限制酶酶切图谱　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

（1）已知BglB基因不含图1中限制酶识别序列。PCR扩增bglB基因时，选用______杆菌基因组DNA作模板，进行扩增的前提是要有一段已知BglB基因的核苷酸序列以便根据这一序列合成___________。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入________和_______两种不同限制酶的识别序列。大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________。

（2）根据2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会________________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（填“50”、“60”、“70”、“80”）℃。

（3）在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高BglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_______（多选）。

A.仅针对BglB基因进行诱变     B.BglB基因产生了定向突变

C.BglB基因可快速累积突变    　　 D.BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

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【生物——选修3：现代生物科技专题】嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶

（1）PCR扩增bglB基因时，选用__________基因组DNA作模板。

（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入____________和___________不同限制酶的识别序列。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________________。

Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响

（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会______________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（单选）。

A.50℃　　　 B.60℃　　　　 C.70℃　　　　 D.80℃

Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_____________（多选）。

A.仅针对bglB基因进行诱变　　　 B.bglB基因产生了定向突变

C.bglB基因可快速累积突变　　　 D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

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【生物——选修3：现代生物科技专题】

嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶

（1）PCR扩增bglB基因时，选用　　　　　　 基因组DNA作模板。

（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入　　　　　　　　 和　　　　　　　 不同限制酶的识别序列。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为　　　　　　 　 。

Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会　　　　　　　　　 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在　　　　　　　　　 （单选）。

A．50℃　　 　　 　 B．60℃　　 　　 　 C．70℃　　 　　 　　 D．80℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中　　　　　 　　 （多选）。

A．仅针对bglB基因进行诱变　　　

B．bglB基因产生了定向突变

C．bglB基因可快速累积突变　　　

D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

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回答有关基因工程的问题

嗜热土壤芽胞杆菌产生的β﹣葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验．

（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是　　　　 技术．

如图为质粒限制酶酶切图谱．下表为限制酶的酶切位点．

（2）如图的质粒上有多个酶切位点，本实验中没有选择XbaI酶切割质粒，原因是　　　　 ．

（3）分析如图，可选择两种不同的限制酶　　　　 和　　　　 切割质粒，以防止质粒自身环化．质粒被切割后，可用　　　　 将其与目的基因连接．在动物基因工程中将目的基因导入受体细胞时通常的方法是　　　　 ．

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为　　　　 ．

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嗜热土壤芽胞杆菌产生的β—葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶

⑴PCR扩增bglB基因时，选用　　　　　　　　　　　　 基因组DNA作模板。

⑵下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入　　　　　　 和　　　　　　　　　　 不同限制酶的识别序列。

⑶大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

⑷据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会　　　　　　　 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在　　　　　　 （单选）。

A．50℃　　 B．60℃　　 C．70℃　 D．80℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率，经过筛选，可获得能表达热稳定性高的BglB酶的基因。

⑸与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中　　　　　　 （多选）

A．仅针对bglB基因进行诱变

B．bglB基因产生了定向突变

C．bglB基因可快速积累突变

D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

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嗜热土壤芽胞杆菌产生的β－葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

(1)PCR扩增BglB基因时，选用________基因组DNA作模板。

(2)上图为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入________和________不同限制酶的识别序列。

(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_______________________。

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嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶

（1）PCR扩增BglB基因时，选用_________杆菌基因组DNA作模板。

（2）如图为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入_____和_______不同限制酶的识别序列。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为________________________。

Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会______________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（单选）。

A．50℃　　　 B．60℃　　　　 C．70℃　　　　 D．80℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_____________（多选）。

A．仅针对BglB基因进行诱变　　　　　　 B．BglB基因产生了定向突变

C．BglB基因可快速累积突变　　　　　　 D．BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

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