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为提高番茄的耐寒能力，可以将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，结合所学知识回答下列问题：
（1）获取鱼的抗冻蛋白基因可以从相关的cDNA文库提取，cDNA文库____________基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。
（2）为在短时间内大量获得抗冻蛋白基因，可用_____________扩增的方法，其原理是__________________________________。在该反应体系中加入的物质有抗冻蛋白基因、4中脱氧核苷酸、____________和___________，在扩增过程中，______________和__________被不断消耗。
（3）抗冻蛋白基因获取之后，需要进行___________________________________，此步骤是基因工程的核心。
（4）将抗冻蛋白基因导入番茄体细胞，常采用的方法是__________。然后用___________技术获得高耐寒的番茄植株。
（5）若要获得大量高耐寒的无病毒番茄植株，可以用______________技术。
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科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列相关问题:
（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用 技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是: 、 、原料和 。
（2）为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的 之后。基因工程核心步骤的名称是 。
（3）研究人员通常采用 法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。
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科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列相关问题:
（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用 技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是: 、 、原料和 。
（2）为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的 之后。基因工程核心步骤的名称是 。
（3）研究人员通常采用 法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。
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科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列相关问题:
（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用 技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是:引物、酶、原料和 。
（2）为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的 之后。基因工程核心步骤的名称是 。
（3）研究人员通常采用 法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。
（4）抗冻番茄的获得要经过脱分化和再分化过程，通过脱分化过程形成 组织，该组织在再分化过程中细胞分裂的方式是 。
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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。请回答下列问题：
（1）PCR技术的关键是耐高温的DNA聚合酶。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能________，因此，DNA复制需要引物。
（2）提取鱼的抗冻蛋白基因的mRNA进行________得到目的基因，在对目的基因扩增时，需要________种引物，若计划用1个目的基因为模板获得m（m大于2）个目的基因，则需要的引物总量是________个。
（3）PCR利用DNA热变性原理，通过控制________控制双链的解聚与结合。
（4）PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为________、________、________三步。在循环之前，需要进行一次预变性，以便增加________。
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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培育转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是
A．可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因
B．将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体
C．利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞
D．在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞
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（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶________分别对________进行切割，切割后产生的DNA片段分别为________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的________过程。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶_____分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________种、_______________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用_______________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的_______________过程。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶________分别对________进行切割，切割后产生的DNA片段分别为________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的________过程。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶_____分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________种、_______________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用_______________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的_______________过程。
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