微生物诱变后的筛选环节极为繁杂，定向筛选常用来筛选营养缺陷型突变株。无氮MM培养基(基本培...

微生物诱变后的筛选环节极为繁杂，定向筛选常用来筛选营养缺陷型突变株。无氮MM培养基(基本培养基)仅能满足野生型菌株生长需要，该培养基中营养缺陷型菌株能存活但不能繁殖。CM培养基（完全培养基）可满足营养缺陷型菌株营养需要。已知青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，并在细菌的繁殖期起杀菌作用。据图回答下列相关问题：

（1）据培养结果推测：1培养皿中是__________培养基，2培养皿中是_____________培养基。

（2）MM培养基浓缩缺陷型后需洗涤和稀释，才能涂平板进行母皿CM培养，假设只进行101，102和103三级梯度稀释，简述从102倍稀释获得103倍稀释的操作步骤：___________________________。

（3）MM培养基加靑霉素后培养能浓缩缺陷型的原因是______________________________。

（4）无氮MM培养基培养2小时的目的是__________________________________________。

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微生物诱变后的筛选环节极为繁杂，定向筛选常用来筛选营养缺陷型突变株。无氮MM培养基(基本培养基)仅能满足野生型菌株生长需要，该培养基中营养缺陷型菌株能存活但不能繁殖。CM培养基（完全培养基）可满足营养缺陷型菌株营养需要。已知青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，并在细菌的繁殖期起杀菌作用。据图回答下列相关问题：

（1）据培养结果推测：1培养皿中是__________培养基，2培养皿中是_____________培养基。

（2）MM培养基浓缩缺陷型后需洗涤和稀释，才能涂平板进行母皿CM培养，假设只进行101，102和103三级梯度稀释，简述从102倍稀释获得103倍稀释的操作步骤：___________________________。

（3）MM培养基加靑霉素后培养能浓缩缺陷型的原因是______________________________。

（4）无氮MM培养基培养2小时的目的是__________________________________________。

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（9分）回答下列关于微生物的问题。

营养缺陷型是指野生型菌株由于基因突变，致使细胞合成途径出现某些缺陷，丧失合成某些物质的能力，如氨基酸、维生素、碱基等的合成能力出现缺陷，必须在基本培养基（野生型菌株最低营养要求）中添加缺陷的营养物质（补充培养基）才能正常生长的一类突变株。基本培养基中加入一些营养物质，可以满足该微生物的各种营养缺陷型生长的培养基称为完全培养基。营养缺陷型在基础理论研究和生产应用中有广泛作用。青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，可用于淘汰野生型菌株。筛选营养缺陷型菌株一般通过四个环节，即诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型。

1.取新活化枯草芽孢杆菌制备菌悬液，再用紫外线照射处理。下列关于将诱变后存活的个体培养，淘汰野生型菌株的做法和原理，正确的是（多选）

培养在含有青霉素的基本培养基中，淘汰野生型菌株，保留缺陷型菌株

培养在含有青霉素的补充培养基中，淘汰野生型菌株，保留缺陷型菌株

完全培养基中青霉素可以杀死野生型菌株，缺陷型菌株得以生存

补充培养基中缺陷型菌株可以生存，野生型菌株不能生存

基本培养基中野生型可以生长繁殖，青霉素将其杀死

基本培养基中缺陷型不可以生长繁殖，青霉素不能将其杀死

2.在培养皿倒上一层不含菌的基本培养基，待冷凝后加上一层含菌的基本培养基，其后再浇上一层不含菌的基本培养基。经培养后出现菌落，在皿底将菌落标记为A1、A2…，然后在其上再倒一薄层完全培养基，再培养，出现新的菌落，在皿底标记为B1、B2…，则A菌落与B菌落分别较可能是_______________、_______________（均选填野生型/突变型）。

3.将待测菌落处理后涂布于某培养基平板上培养，用灭菌牙签逐个挑取待测菌，先后点接于A培养基和B培养基平板上。前后位置及号码相对应。培养后观察。见图一。为检出营养缺陷型，A、B培养基应分别为__________培养基、__________培养基。菌落（      ）为营养缺陷型。

4.为鉴定上步检出的营养缺陷型是哪种营养缺陷型，将待测菌种悬液涂于图二含有基本培养基的培养皿中，培养皿背面划线标注C、D、E三区。C、D、E为三滤纸片，分别浸有氨基酸混合液、维生素混合液和碱基混合液。培养后观察。当观察到________________________现象，说明是该营养缺陷型。图二培养基也可称为_________培养基。

5.如检测菌为碱基类营养缺陷型，要进一步鉴定是哪种碱基营养缺陷型，可同图二方法加浸该营养物质的滤纸片，如加浸________________的滤纸片。

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经人工诱变获得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌体自身不能合成天冬氨酸，必须从外界环境中获取天冬氨酸才能生长繁殖。下图是科研人员利用“影印法”筛选天冬氨酸缺陷型菌株的部分过程（注:基本培养基中不含氨基酸，完全培养基中含所有种类的氨基酸）。回答下列问题：

（1）过程①接种的方法是________________。待测培养皿中的培养基是___________(答“基本”或“完全”）培养基。

（2）过程②是将印在同一块丝绒布上的菌落，先后转印至两个不同的平板上。该过程应该先转印到_______________(答“基本”或“完全”)培养基上，原因是____________________。

（3）完成②过程的转印并在28℃的培养箱中培养2天后，两个平板上出现的菌落有的相同，有的不同。完全培养基上出现的菌落A和菌落B中，不可能是天冬氨酸缺陷型菌株的是_________菌落（答“A”或“B”），原因是___________________。

（4）为了进一步鉴定筛选到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株，科研人员又制备了甲、乙两个平板，这两个平板中营养成分的差异是________________。将待鉴定菌种接种到两个平板中，置于适宜条件下培养一段时间后，若观察到两个平板中菌落的生长情况是__________，则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。

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经人工诱变获得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌体自身不能合成天冬氨酸，必须从外界环境中获取天冬氨酸才能生长繁殖。下图是科研人员利用“影印法”筛选天冬氨酸缺陷型菌株的部分过程（注:基本培养基中不含氨基酸，完全培养基中含所有种类的氨基酸）。回答下列问题：

（1）过程①接种的方法是________________。待测培养皿中的培养基是___________(答“基本”或“完全”）培养基。

（2）过程②是将印在同一块丝绒布上的菌落，先后转印至两个不同的平板上。该过程应该先转印到_______________(答“基本”或“完全”)培养基上，原因是____________________。

（3）完成②过程的转印并在28℃的培养箱中培养2天后，两个平板上出现的菌落有的相同，有的不同。完全培养基上出现的菌落A和菌落B中，不可能是天冬氨酸缺陷型菌株的是_________菌落（答“A”或“B”），原因是___________________。

（4）为了进一步鉴定筛选到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株，科研人员又制备了甲、乙两个平板，这两个平板中营养成分的差异是________________。将待鉴定菌种接种到两个平板中，置于适宜条件下培养一段时间后，若观察到两个平板中菌落的生长情况是__________，则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。

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经人工诱变获得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌体自身不能合成天冬氨酸，必须从外界环境中获取天冬氨酸才能生长繁殖。下图是科研人员利用“影印法”筛选天冬氨酸缺陷型菌株的部分过程（注:基本培养基中不含氨基酸，完全培养基中含所有种类的氨基酸）。回答下列问题：

（1）过程①接种的方法是________________。待测培养皿中的培养基是___________(答“基本”或“完全”）培养基。

（2）过程②是将印在同一块丝绒布上的菌落，先后转印至两个不同的平板上。该过程应该先转印到_______________(答“基本”或“完全”)培养基上，原因是____________________。

（3）完成②过程的转印并在28℃的培养箱中培养2天后，两个平板上出现的菌落有的相同，有的不同。完全培养基上出现的菌落A和菌落B中，不可能是天冬氨酸缺陷型菌株的是_________菌落（答“A”或“B”），原因是___________________。

（4）为了进一步鉴定筛选到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株，科研人员又制备了甲、乙两个平板，这两个平板中营养成分的差异是________________。将待鉴定菌种接种到两个平板中，置于适宜条件下培养一段时间后，若观察到两个平板中菌落的生长情况是__________，则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。

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营养缺陷型大肠杆菌需在基本培养基中添加某些物质才能生长。 A 菌株为甲硫氨酸（met-）和生物素（bio-）缺陷型突变体，B 菌株为苏氨酸（thr-）、亮氨酸（leu-）、硫胺素（thi-）缺陷型突变体。用A、B 两种菌株进行 4组实验，培养条件和结果如下图所示。

（1）培养基为细菌生长提供水、无机盐、________。乙组培养基出现菌落的频率为 10-7， 大肠杆菌单个基因发生突变的几率约为10-7，科学家判断乙组出现菌落不是基因突变 的结果，其理由是________。推测基本培养基出现菌落是由于基因的转移和重组，丁 组实验结果说明这种基因的转移需要两种菌株细胞________。

（2）科学家用某种药物处理A 或 B 菌株使其停止分裂（但不致死）， 混合并培养，过程及 结果如下。　　

Ⅰ：处理过的 B菌株+未处理的 A菌株→基本培养基上无菌落

Ⅱ：处理过的A 菌株+未处理的 B菌株→基本培养基上有菌落

结果说明两菌株 DNA 转移的方向是________。　　　　　　

a．A→B　　 b．A←B　 c．AB　　 d．不确定

（3）进一步研究发现某些菌株拟核上有一段DNA序列（F 因子），其上有复制原点（oriT）。 细菌混合后，F 因子的一条链由供体菌逐步转移至受体菌，在受体菌中复制后整合到拟核 DNA 上，发生基因重组。留在供体菌中的 F 因子单链通过自我复制恢复双链。若无 F 因子则不能发生 DNA 转移。

①由此推测上述（2）中实验 I 基本培养基无菌落的原因是________。

②上述 DNA 转移和复制过程可用下图________表示。

（4）A 菌株（met-、bio-）对链霉素敏感，B 菌株（thr-、leu-、thi-）具有链霉素抗性。将 A、 B 菌株混合，在不同时间点搅拌混合菌液，以中断DNA 转移。之后将各时间点中断转移的菌液接种在含如下物质的基本培养基上选择培养，分别记录出现菌落的短混合时间。

①培养基中均加入链霉素的目的是________。1号培养基出现菌落的原因是________。

②在选择培养基上出现菌落所需的短混合时间反映了相关基因与oriT 间的距离。在下图中 oriT右侧画出 A 菌株 thr+ 、leu+ 、thi+基因在拟核上的位置。

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营养缺陷型大肠杆菌需在基本培养基中添加某些物质才能生长。 A菌株为甲硫氨酸（met-）和生物素（bio-）缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸（thr-）、亮氨酸（leu-）、硫胺素（thi-）缺陷型突变体。用A、B两种菌株进行4组实验，培养条件和结果如下图所示。

（1）培养基为细菌生长提供水、无机盐、________。乙组培养基出现菌落的频率为10-7，大肠杆菌单个基因发生突变的几率约为10-7，科学家判断乙组出现菌落不是基因突变的结果，其理由是________。推测基本培养基出现菌落是由于基因的转移和重组，丁组实验结果说明这种基因的转移需要两种菌株细胞________。

（2）科学家用某种药物处理A或B菌株使其停止分裂（但不致死），混合并培养，过程及结果如下。　

I:处理过的B菌株+未处理的A菌株→基本培养基上无菌落

II: 处理过的A菌株+未处理的B菌株→基本培养基上有菌落

结果说明两菌株DNA转移的方向是________。

a．AB　　　　 b．A B　　　　　 c．A B　　　　 d．不确定

（3）进一步研究发现某些菌株拟核上有一段DNA序列（F因子），其上有复制原点（oriT）。细菌混合后，F因子的一条链由供体菌逐步转移至受体菌，在受体菌中复制后整合到拟核DNA上，发生基因重组。留在供体菌中的F因子单链通过自我复制恢复双链。若无F因子则不能发生DNA转移。

①由此推测上述（2）中实验Ι基本培养基无菌落的原因是________。

②上述DNA转移和复制过程可用下图________表示。

（4）A菌株（met-、bio-）对链霉素敏感，B菌株（thr-、leu-、thi-）具有链霉素抗性。将A、B菌株混合，在不同时间点搅拌混合菌液，以中断DNA转移。之后将各时间点中断转移的菌液接种在含如下物质的基本培养基上选择培养，分别记录出现菌落的最短混合时间。

①培养基中均加入链霉素的目的是________。1号培养基出现菌落的原因是____。

②在选择培养基上出现菌落所需的最短混合时间反映了相关基因与oriT间的距离。在下图中oriT右侧画出A菌株thr+、leu+、thi+基因在拟核上的位置____。

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“水平基因转移”是指在生物个体之间所进行的遗传物质交流的现象，主要发生在微生物中。野生型大肠杆菌能够在基本培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某些营养素，而不能在基本培养基上生长。科学工作者利用菌株A和菌株B进行了如下两个实验。实验一：将菌株A和菌株B混合后，涂布于基本培养基上，结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别置于U型管的两端，中间由过滤器隔开。加压力或吸力后，培养液可以自由流通，但细菌细胞不能通过。经几小时培养后，将菌液A、B分别涂布于基本培养基上，结果如图2。

下列推测正确的是

A.可以用“水平基因转移”来解释上述现象

B.不同菌株间接触后才可能交换遗传物质

C.混合培养的菌株都能在基本培养基上生长

D.菌株A和菌株B互为对方提供所缺营养素

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营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。下列说法正确的是（　　 ）

A.将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法

B.甲丙两种培养基中均添加了特殊营养物质

C.乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株

D.甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异

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