酵母菌对酒精的耐受性影响酒类酿造研究者利用酒精敏感型酵母菌（中）和酒精耐受型酵母菌（乙）进...

酵母菌对酒精的耐受性影响酒类酿造研究者利用酒精敏感型酵母菌（中）和酒精耐受型酵母菌（乙）进行了相关实验，回答问题。

（1）酒精是酵母菌进行___________的产物，在___________中产生。发酵过程中，随着发酵液酒精浓度增加，酒精分子可插入到生物膜___________的疏水区，破坏膜完整性。

（2）海藻糖由两分子葡萄糖连接而成，可通过与膜成分结合而稳定膜结构。研究者制备了含有和不含葡萄糖的培养基培养两种酵母菌，并在酒精冲击的条件下测定相关指标。如下图。

①将两种酵母菌置于含酒精的培养基中震荡培养，同时设置___________的培养基作为对照。每隔一段时间取菌液，利用___________法接种在固体培养基表面进行计数并计算细胞存活率。

②图1、2结果显示，___________有利于酵母菌合成海藻糖；结合图3、4结果可知，海藻糖含量高的酵母菌存活率___________。

③海藻糖含量提高将助于提高酵母菌的酒精耐受力的实验证据有___________。

（3）综上所述，推测酒精耐受型酵母菌的耐受机理是____________________。

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[生物——选修1:生物技术实践]（15分）回答下列有关微生物及其培养的相关问题

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵,而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精,但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答:

（1）微生物实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是　　　　　 ；为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该将器皿　　　　　　　 。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙指示的结构依次是 　　　　　　　　 。

（2）制备酵母菌培养基要进行平板操作,待平板冷凝后,要将培养皿倒置,其主要原因　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）取从自然界中采集的葡萄,然后在超净台上将葡萄置于0.1%氯化汞水溶液中进行表面消毒5min,再用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,然后进行纯化培养。研究者在经过接种后得到了一个经培养后菌落分布如下图乙所示的平板,推测接种时可能的操作失误是　　　　　　 。为了确定培养基是否被污染,需要进行的操作是:　　　　　　　　　　　 。

（4）下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配置的培养基配方,请指出其中的明显不足之处　　　　　　　　　　　　　　　 。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，但自然界中的某些酵母可以分解木糖产生酒精，但对酒精的耐受能力较差，科学家们利用人工诱变的技术获得了能利用木糖且对酒精耐受力强的酿酒酵母突变型，请回答下列问题：

（1）获得上述突变型酿酒酵母的方法是：人工诱变后，使用_________________的液体培养基进行选择培养。

（2）获得上述突变型酿酒酵母后，需要进行分离纯化，操作步骤如图：

制备以上过程所需的培养基时需要倒平板操作，平板冷凝后需要倒置的原因是_______________，图乙是图甲过程A纯化培养的结果，接种时划线的顺序是________，图丙是图甲过程C纯化培养的结果，推测接种时主要的操作失误是_____________。

（3）为测定突变型酿酒酵母的活性，用适宜浓度的海藻酸钠溶液将活化的酵母细胞固定化后发酵无菌麦芽汁制酒，实验中当海藻酸钠浓度较低时，细胞活力较低原因是____。若发酵条件符合操作要求。10天后检查发酵液发现麦芽汁几乎无酒味，发酵失败最可能的原因是____。

（4）在血红蛋白的提取和分离实验中，从红细胞中释放出血红蛋白常用的方法是____，纯化蛋白质常用的方法是___ 。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）酿酒酵母代谢类型是　　　　　 无氧呼吸的反应式为　　　　　　　　　　　　　　　

（2）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用　　　　　 法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。在葡萄酒酿造过程中，葡萄也需要冲洗，其主要目的是　　　　　　　　　　 。

（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到　　　　　 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经PCR技术获得目的基因，PCR技术获得同一种目的基因的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（5）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）酿酒酵母代谢类型是　　　　　 无氧呼吸的反应式为　　　　　　　　

（2）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用　　　　　 法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。在葡萄酒酿造过程中，葡萄也需要冲洗，其主要目的是　　　　　　　　　　 。

（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到　　　　　 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经PCR技术获得目的基因，PCR技术获得同一种目的基因的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（5）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精，但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程，请分析回答下列问题。

(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用　　　　 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中的液体经适当稀释后，用　　　　 (方法)接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌　　　　　　　 。从存活的酵母菌中提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。

(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含　　 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

(4)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示：

据图分析，将转基因酿酒酵母接种在以　　　　 为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的　　 糖被快速消耗，随着发酵继续进行，转基因酿酒酵母能够　　　　　　　　　 ，说明所需菌株培育成功。

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（8分）常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母培育的过程，请分析回答下列问题：

（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用___________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中液体经适当稀释后，接种于_____________培养基上，适宜条件下培养，获得各种菌落。

（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖作为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。从存活的酵母菌提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。

（3）将目的基因连接到一种穿梭质粒（可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒）上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含　　　　　　 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏　　　　　　　　　　　　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（4）对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示。

据图分析，将转基因酿酒酵母接种在_____________________为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的___________被快速消耗，随着发酵继续进行，酿酒酵母能够______________________________________________，说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

(1)为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________。

(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到____℃左右时，才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。

(4)取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min，再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是__________________________________________。

(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方，请指出其中的明显不足之处________。

(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能____________________，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

（1）为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿　　　　　　 。右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是 　　　　　　 。

（2）在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同　　　　 一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

（3）用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你可以用　　　　　　 办法来估计培养基的此温度。

（4）取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0．1%　　　　　 水溶液中进行表面消毒5min，再用　　　　 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序是依次是　　　　　 。（用编号表示）。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配置的培养基配方，请指出其中的明显不足之处　　　　　　 。

（6）再将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（7）将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

(1)为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________。

(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到____℃左右时，才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。

(4)取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min，再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是__________________________________________。

(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方，请指出其中的明显不足之处________。

(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能____________________，即说明所需菌株培育成功。

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