下图1为某种常用质粒的序列图,LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)基因工程的核心步骤是______________。
(2)实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒,若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有__________和________。
(3)成功导入重组质粒的大肠杆菌菌落显_______,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_______(填“能”或“不能)在该培养基上生存。
(4)将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物,获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段,则目的基因的长度为______kb(已知目的基因的长度大于1kb,1kb=1000个碱基对)。
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下图1为某种常用质粒的序列图,LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
⑴若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有__________和___________。基因表达载体的组成除了目的基因外,还必须有_______、终止子和标记基因等。对获取的目的基因可用_________技术对其扩增。
⑵实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了__________;若大肠杆菌菌落显白色,说明导入了_________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_______(填“能”或“不能)在该培养基上生存。
⑶将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,若仅考虑质粒与目的基因相连接,会有________种连接方式。然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物,获得了长度为0.8kb、3.8kb、1.1kb和3.5kb四种长度的DNA片段,则目的基因的长度为______kb(已知目的基因的长度大于2kb,1kb=1000个碱基对)。
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下图1为某种常用质粒的序列图,LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)基因工程的核心步骤是______________。
(2)实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒,若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有__________和________。
(3)成功导入重组质粒的大肠杆菌菌落显_______,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_______(填“能”或“不能)在该培养基上生存。
(4)将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物,获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段,则目的基因的长度为______kb(已知目的基因的长度大于1kb,1kb=1000个碱基对)。
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下图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有________,构建重组质粒时需要的工具酶有_______________,对获取的目的基因可用____________技术对其扩增。
(2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了_____________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_____________(填“能”或“不能”)在该培养基上生存。
(3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的_____________种DNA片段。(假定每一种限制酶都充分切割。)
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下图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有________,构建重组质粒时需要的工具酶有_______________,对获取的目的基因可用____________技术对其扩增。
(2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了_____________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_____________(填“能”或“不能”)在该培养基上生存。
(3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的_____________种DNA片段。(假定每一种限制酶都充分切割。)
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如图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X﹣gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列.请回答下列问题:
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有______________,构建重组质粒时需要的工具酶有___________,对获取的目的基因可用PCR技术对其扩增.
(2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了__________.没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_____(填“能”或“不能”)在该培养基上生存.
(3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的_____种DNA片段.
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如图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X﹣gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有________________________,构建重组质粒时需要的工具酶有________________,对获取的目的基因可用PCR技术对其扩增。
(2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了____________________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_________(填“能”或 “不能”)在该培养基上生存。
(3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的_______种DNA片段。
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下图1为某种质粒结构,LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Amp为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列和切点。回答下列问题
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有______________和_________________。构建重组质粒时需要的工具酶有_________________。
(2)用BamHI和BglII两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了_____________。
(3)BamHI酶切的DNA末端与BglII酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为_____________(要求写出双链)。如用BamHI酶、BglII酶和EcoRI酶对于该重组质粒进行切割,能切开_______个切口。
(4)下图中A、B、C、D表示利用PCR扩增目的基因过程中可能用到的四种引物,回答下列相关问题:
①PCR技术需要用到_____________酶。
②若需要扩增图中目的基因,由于DNA复制时,子链只能由5′向3′方向延伸,则利用PCR技术扩增该基因时需要选择_____________(A、B、C、D)的组合作为引物。
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下图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Amp为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:
(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有_________________和_________________,构建重组质粒时需要的工具酶有_________________,对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。
(2)实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了_____________。
(3)将若干个质粒和目的基因用BamH I和BlgII两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可以获得了_________种长度的DNA片段。
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如图1表示某质粒,该质粒含有抗氨苄青霉素抗性基因(amp')和LacZ基因,LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶,该酶能将白色底物X-Gal转化为蓝色产物,图2表示含目的基因的DNA片段,实验小组利用该质粒为载体将目的基因导入大肠杆菌,并筛选成功导入重组质粒的受体细胞(ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位点)。请回答下列问题:
(1)构建基因表达载体的目的是_________。在构建基因表达载体时应选用的限制酶是__________。
(2)将重组质粒导入大肠杆菌时,应用__________处理大肠杆菌,制备感受态细胞,实验室选用微生物作为受体细胞的优点是_________。
(3)重组质粒导入大肠杆菌后,应将大肠杆菌置于以X-Gal为底物,并添加_______________的培养基上培养,挑选出__________(填“白色”或“蓝色”)菌落。
(4)检测目的基因是否成功导入受体细胞常用的方法是__________,该方法依据的原理是__________。
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下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lcZ为蓝色显色基因,lacZ正常表达菌落呈蓝色。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点,括号内的数据是该切点与复制原点的距离,单位为kb(1kb=1000个碱基对)。回答下列问题:
(1)用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时,应该选择质粒________(填“质粒A”“质粒B”或者“质粒C”),选择的限制酶是___________。
(2)转录的起始部位称为____________,是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,它是RNA聚合酶______________________的部位。
(3)如果选择的质粒与目的基因重组成功,并且在受体细胞中能正常表达,则所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切,并进行电泳观察,可出现的片段长度有_____________或____________。
(4)导入大肠杆菌后,为了筛选出含目的基因的大肠杆菌,在普通琼脂培养基中还需加入_________,形成的菌落颜色为_____________。
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