尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物...

尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。

回答下列问题：

（1）对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：

第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要　　 （填“消毒”或“灭菌”）。

第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是　　　　 。

第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而　　　　 则不能生长繁殖。（注：实验中所用的培养基经检测符合要求，且均在无菌条件下操作）

（2）若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数　　　　　　　 。

（3）对土壤中分解尿素的微生物作进一步的鉴定

若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在上表培养基配方中添加的物质是　　　 、　　　　　 。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是　　　　　　　　　　 。

（4）分解尿素的微生物在生态系统中的作用是　　　　　　　　 。

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尿素［CO(NH2)2］是一种重要的农业氮肥。但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某生物兵趣小组欲分离土壤中分解尿素的细菌，

设计了如下实验流程：

土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→计数与鉴定

请回答相关问题：

（1）涂布培养前需要梯度稀释，其目的是____，如果得到了2个或2个以上菌落数目在____之间的平板，则说明稀释操作比较成功。

（2）选择培养过程能够“浓缩”尿素分解菌是因为其培养基____

（3）取1g土壤，按下图稀释后，在三个平板上分别接入0.1ml稀释液后，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别是52, 50和48。据此可计算出每克土样中的活菌数为___，该数值与活菌的实际数目相比____（偏高／偏低），原因是：____

（4）在培养基上滴加酚红指示剂可以鉴定其上细菌能否分解尿素，其原理是____

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尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素不能被农作物直接吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。回答问题：

（1）土壤中的某些细菌能分解尿素，是因为它们能合成______。

（2）配制好的培养基常用______法进行灭菌。为了检测所用培养基平板灭菌是否合格，需要进行的操作是______。

（3）为了筛选到能分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择尿素作为唯一氮源，原因是______；

若平板上长出菌落，可通过加入显色剂初步鉴定该种细菌能够分解尿素，加入的显色剂是______。

（4）一位同学在某浓度下稀释涂布了一个平板，统计的菌落数为230．该同学的实验结果______（填“是”或“否”）具有说服力，原因是______。

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某生物兴趣小组，进行土壤中尿素分解菌的分离和计数实验。请回答下列问题：

（1）实验原理：尿素是一种重要的农业氮肥，可是并不能直接被农作物吸收，需要转变成氨，才能被吸收，这个转变依赖于土壤中能产生__________的微生物的作用。

（2）实验步骤及结果

Ⅰ：配制培养基（成分：葡萄糖、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、尿素、Y、H2O、琼脂），并制作无菌平板；

Ⅱ：设置__________组和若干实验组，进行相关操作；

Ⅲ：将各组平板置于恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

①为了更好的鉴别出此类微生物，在培养基配方中加入了Y，Y是__________。

②为了对实验的结果进行进一步统计，需要用__________法进行接种。具体情况如下图：

③恒温培养48小时后，在稀释倍数为105下，平板上的菌落数目在30～300之间，小组成员进行统计，应注意统计周围为_________菌落进行记数。统计三个平板的菌落数目，分别为68、73、87，则锥形瓶中每毫升稀释液中，尿素分解菌的活菌数为_________。

Ⅳ：实验结果

兴趣小组的同学在统计菌落数目时，除了上述统计的菌落外，还发现有些菌落周围的培养基没有变化，试分析这些菌落产生的可能原因（答出一点即可）_________。

（3）欲将上述实验得到的尿素分解菌进行长期保存，可采用_________的方法。

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尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氮和CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：

（1）土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成____________。

（2）为筛选尿素分解而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外还包括水、碳源____________等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是________________________。

（3）一般依据尿素分解菌菌落的____________、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、42、45，则1mL悬液中活细菌数量为____________个。上述过程采用的接种方法是________________________。

（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是________________________。

【答案】　 脲酶　 无机盐　 只有以尿素作为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长　 形态、大小　 4.2×108　 稀释涂布平板法　 单独设置一个灭菌后不接种样液的培养皿（含培养基）进行培养

【解析】本题考查分解尿素的微生物的培养与计数，要求考生理解脲酶的作用，能配制合适的培养基培养细菌并进行计数。

（1）脲酶能催化尿素分解为氨气和二氧化碳，土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成脲酶。

（2）为筛选尿素分解而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外还包括水、碳源、无机盐等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是只有以尿素作为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长。

（3）一般依据尿素分解菌菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、42、45，则1mL悬液中活细菌数量为（39+42+45）30.1×106=4.2×108个；上述过程采用的接种方法是稀释涂布平板法。

（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可单独设置一个灭菌后不接种样液的培养皿（含培养基）进行培养，若该培养皿中没有出现菌落，则说明该培养基及培养皿灭菌合格。

【点睛】易错知识点拨:

1)土壤中分解尿素的细菌筛选原理

①选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源

②鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂变红，说明细菌能分解尿素

2）微生物数量统计方法：

(1)直接计数法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)

(2)间接计数法：稀释涂布平板法

3）两种纯化细菌的方法的比较：

【题型】非选择题
【结束】
12

干扰素是动物或人体细胞受到病毒感染后产生的一种糖蛋白，具有抗病毒、抑制细胞增殖及抗肿瘤的作用。 培育转干扰素基因马铃薯植株的大致流程如图所示。请回答下列问题：

（1）过程①中剪切质粒和目的基因时所需要的工具酶是_____________。

（2）过程②中将重组质粒导入根瘤农杆菌时，常用_____________处理根瘤农杆菌，使其成为感受态细胞，最终使干扰素基因插入马铃薯细胞的_____________上。

（3）图中过程③和过程④合称为_____________技术，该技术能体现细胞的_____________。

（4）在分子水平上检测转基因是否成功包括三个方面:________________。

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尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氮和CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：

（1）土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成____________。

（2）为筛选尿素分解而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外还包括水、碳源____________等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是________________________。

（3）一般依据尿素分解菌菌落的____________、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、42、45，则1mL悬液中活细菌数量为____________个。上述过程采用的接种方法是________________________。

（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是________________________。

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尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和CO2后才能被农作物利用。回答下列问题：

（1）土壤中的某些细菌能分解尿素，其根本原因是_________________。

（2）为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源和____等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是______________________。

（3）一般依据尿素分解菌菌落的______、隆起程度和颜色等特征来区分统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取0．1mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为152、155、158，则1mL悬液中活细菌数量为_____个。上述过程采用的接种方法是________________。

（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是___________________。

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（8分）【生物一生物技术实践】

尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。

某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?_____（能／不能），原因是__________________________________。

（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的__________________就能大约推测出样品中活菌数。

（3）初步分离脲酶通常用________法，如下图，试管中收集到的液体最先出现的是___________。鉴定分离出的脲酶纯化程度，一般采用_______法。

（4）该同学设想：由活性脲酶和尿素混合，制成“加酶尿素"，尿素肥效一定更高。为了提高“加酶尿素"中脲酶的利用率，应当采用________技术。

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【生物—生物技术实践】

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）右图是利用________法进行微生物接种，把聚焦的菌种逐步________分散到培养基的表面。

（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________。

（3）下表是一种培养基配方

①配制培养基的操作步骤（      ）

a.调节pH          b．计算     c.溶化     d.称量         e.灭菌

A．a→b→c→d→e               B.e→b→d→c→a

C.b→d→c→a→e                D.b→d→c→e→a

②该培养基属于培养基（多选）。

A．液体       B．固体        C．鉴定       D．选择     E.天然

③使用该培养基的目的是________。

④在培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。

（4）在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________。（多选）

A．由于土样不同     B．由于培养基污染     C．由于操作失误      D．没有设置对照

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尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）右图是利用________法进行微生物接种，把聚焦的菌种逐步________分散到培养基的表面。

（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________。

（3）下表是一种培养基配方

①配制培养基的操作步骤（      ）

a.调节pH          b．计算     c.溶化     d.称量         e.灭菌

A．a→b→c→d→e               B.e→b→d→c→a

C.b→d→c→a→e                D.b→d→c→e→a

②该培养基属于________培养基（多选）。

A．液体       B．固体        C．鉴定       D．选择     E.天然

③使用该培养基的目的是________。

④在培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。

（4）在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________。（多选）

A．由于土样不同     B．由于培养基污染     C．由于操作失误      D．没有设置对照

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