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利用基因工程等技术手段可以生产各种抗性棺物品种。如科学家将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列问题：
（1）基因工程技术的核心步骤是___________，这一过程中需要用到的工具酶是___________。
（2）在基因工程中，将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞最常采用的方法是_______。通常采用_______技术来检测鱼的抗冻蛋白基因是否插入了番茄的基因组。鱼的抗冻蛋白基因在番茄细胞中表达时是遵循中心法则的，请用箭头和文字写出基因表达的过程中遗传信息在不同分子之间的流动情况：_________________。
（3）将含有鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞培育成具有抗冻能力的番茄植株，运用的生物技术是_______，该技术的理论基础是___________。所用培养基中需要添加生长素和细胞分裂素，它们的作用是启动细胞进行有丝分裂，诱导离体细胞经过___________，从而形成具有抗冻能力的番茄植株。
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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培养转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是
A. 可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因
B. 利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞
C. 利用选择性培养基对构建的基因表达载体直接筛选
D. 在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄植株
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（2015•泰州三模）科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．在培育转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是（ ）
A．可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因
B．将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体
C．利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞
D．在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞
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为提高番茄的耐寒能力，可以将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，结合所学知识回答下列问题：
（1）获取鱼的抗冻蛋白基因可以从相关的cDNA文库提取，cDNA文库______基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。
（2）为在短时间内大量获得抗冻蛋白基因，可用_____扩增的方法，其原理是______。
（3）抗冻蛋白基因获取之后，需要进行__________________，此步骤是基因工程的核心。
（4）将抗冻蛋白基因导入番茄体细胞，常采用的方法是__________。然后用___________技术获得高耐寒的番茄植株。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。
(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。
(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
_______________________________________________________________________________
_____________________________________________________
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr 为抗氨苄青霉素基因），其中①—④ 是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：
（l）基因工程的核心是_______________________________。
（2）构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用_________________酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为_______种和______ 种。
（3）要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含______________________
的培养基中筛选番茄组织细胞。
（4）研究人员通常采用_______________________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.
（5）基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定, 在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用_________________技术，采用_____________方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。
（6）图中③④分别指的是___________ 、 __________,欲获得人工种子应培养到___________阶段。将II细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是__________________________
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstI、SmaI、HindIII、AIuI等四种限制性核酸内切酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampt为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I、II表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶______________分别对鱼抗冻蛋白基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________、_________种。
（2）基因工程中核心步骤是_________（填序号）,该步骤的目的是_________________________。为了使目的基因正常表达，其首端必须有启动子，它是___________识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择___________进行连接。（填“E·coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）
（3）图中将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞的方法称为____________________。它是利用运载体Ti质粒中含有___________，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。
（4）检测番茄植株细胞中鱼抗冻蛋白基因是否成功表达，从分子水平常采用的方法是________。
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（10分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶___________和限制酶___________分别对___________（2分）和质粒进行切割。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有______作为标记基因。
（3）研究人员通常采用___________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用___________（2分）技术。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___________和___________过程。
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四种限制酶切割位点,下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为氨苄青霉素抗性基因),其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图回答下列问题。
在构建基因表达载体时,可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,在此实例中,应该选用限制酶____________和限制
酶_____分别对__________ 和_________进行切割,切割后产生的DNA片段分别为_____和____种。
培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长,要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应使基因表达载体Ⅰ中含有_________作为标记基因。
(3)研究人员通常采用__________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采
用__________技术,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
(4)利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的________和____________过程。
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