基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）图3中的A、B、C、D为与目的基因两端配对的四种单链DNA片段，在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段，三种方法总共可以形成________种不同的片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有______种。
高三生物非选择题困难题
基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）图3中的A、B、C、D为与目的基因两端配对的四种单链DNA片段，在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段，三种方法总共可以形成________种不同的片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有______种。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。回答下列问题：
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是__________之间相连的键。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是__________。
A.若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B.DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C.若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D.就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________作为引物（DNA复制子链的延伸方向5’→3’）。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段__________个。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是____________________。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。回答下列问题：
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是__________之间相连的键。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是__________。
A.若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B.DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C.若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D.就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________作为引物（DNA复制子链的延伸方向5’→3’）。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段__________个。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是____________________。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是__________之间相连的化学键。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是__。
A．若图中右侧碱基序列为ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于①②处
C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取_____作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。该DNA分子在PCR仪中经过第_______次循环会产生等长的目的基因，该次循环能产生__个这样的片段。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含____________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是____________________。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是__________之间相连的化学键。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是__。
A．若图中右侧碱基序列为ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于①②处
C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取_____作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。该DNA分子在PCR仪中经过第_______次循环会产生等长的目的基因，该次循环能产生__个这样的片段。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含____________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是____________________。
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下图中显示含目的基因的DNA片段、限制性核酸内切酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的切割位点）、四种质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是（ ）
A．①④ B．②③ C．① D．①③
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒．请回答下列问题：
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是____________之间相连的化学键．
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_________。
A．若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取_________作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）．该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段_________个。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有________种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_______ 基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是_____________________________。
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图甲中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种基因表达载体示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素时，需用到图乙所示质粒以及图甲所示的有关酶。请回答下列问题：
（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_________________(多选题，填序号）。
①能自我复制 ②具有标记基因 ③能启动外源目的基因的转录和翻译 ④含有多个酶切位点
（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因____________（多选题，填序号）。
①消化道黏膜上皮细胞 ②胰岛A细胞 ③胰岛B细胞 ④成熟红细胞
（3）经BamHⅠ酶切割得到的目的基因__________(填“能”或“不能”）与图乙所示质粒被Sau3AⅠ酶切后的产物连接，理由是______________________。
（4）将人胰岛素基因与图乙所示质粒所拼接的重组质粒导入到大肠杆菌的常用方法是__________，检测目的基因是否导入成功，可用含有___________的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是_______。
（5）已知图乙所示质粒经EcoRⅠ和Sau3AⅠ联合酶切后形成2.0kb和4.2kb(lkb=1000对碱基)两种DNA片段。若将0.8kb的单个基因插在质粒的Sau3AⅠ位点处，所形成的重组质粒用EcoRⅠ和Sau3AⅠ联合酶切后，能形成的DNA片段长度分别为___________________。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。
请回答下列问题：
（1）请在方框内写出由图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端。
____
（2）图3为目的基因中的某一片段，连接②处化学键的酶有_____________。
（3）若利用PCR技术増加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DMA片段中除了B作为引物外，_________(填写A或C或D）亦可作为引物。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。
请回答下列问题：
（1）请在方框内写出由图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端。
____
（2）图3为目的基因中的某一片段，连接②处化学键的酶有_____________。
（3）若利用PCR技术増加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DMA片段中除了B作为引物外，_________(填写A或C或D）亦可作为引物。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
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