(12分)【生物——现代生物科技专题】
牛结核病是一种慢性传染病，在世界范围内广泛传播，来自于小鼠的SP110基因能够抑制牛结核分枝杆菌的增殖。下图是培育抗结核病转基因克隆牛的流程图。请据图回答：
(1)培育过程中涉及到的细胞工程技术有_________________、_____________。
(2)重组质粒由目的基因、____________、____________、标记基因等组成，过程I最常用的方法是_____________________。
(3)过程Ⅱ的胚胎培养液中除无机盐、有机盐和营养成分外，还需要添加_________等天然成分。
(4)过程III表示诱导成纤维细胞与处于____________期的去核卵母细胞融合。重组胚胎通过_________技术移入受体母牛子宫内，暂时不移入的可使用__________方法保存。
(5)若要提高重组胚胎的利用率，可对__________期的胚胎进行分割。
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(12分)【生物——现代生物科技专题】
牛结核病是一种慢性传染病，在世界范围内广泛传播，来自于小鼠的SP110基因能够抑制牛结核分枝杆菌的增殖。下图是培育抗结核病转基因克隆牛的流程图。请据图回答：
(1)培育过程中涉及到的细胞工程技术有_________________、_____________。
(2)重组质粒由目的基因、____________、____________、标记基因等组成，过程I最常用的方法是_____________________。
(3)过程Ⅱ的胚胎培养液中除无机盐、有机盐和营养成分外，还需要添加_________等天然成分。
(4)过程III表示诱导成纤维细胞与处于____________期的去核卵母细胞融合。重组胚胎通过_________技术移入受体母牛子宫内，暂时不移入的可使用__________方法保存。
(5)若要提高重组胚胎的利用率，可对__________期的胚胎进行分割。
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研究表明，小鼠SP110基因能够提高动物对结核杆菌的抗性，我国某研究团队利用基因工程成功孕育出带有小鼠SP110基因的转基因牛。
（1）利用PCR技术对SP110基因进行扩增时，所需的原料为__________；加入的Taq酶与普通的DNA聚合酶相比，其特点是____________。
（2）获得转基因牛的过程中，构建的基因表达载体应包含小鼠的SP110基因及其启动子等调控元件。其中启动子的作用是________，将该载体导入受体细胞常采用的方法是__________。
（3）携带了SP110基因的胚胎干细胞能在体外构建胚胎并发育成个体，这体现胚胎干细胞具有_____。经检测，用同种限制酶切割并构建的基因表达载体中，有部分基因表达载体中的SP110基因不能正确表达，最可能的原因是_____________。
（4）研究者通过体外受精的方式让转基因牛产下试管牛。在试管牛的培育过程中，需对精子进行____处理，需将卵母细胞培养至__________时，二者才都具备受精能力。
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(12分)【生物——现代生物科技专题】
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_________，此技术属于_________工程范畴。
(2)步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其__________中分离出ES细胞。培养ES细胞时，为满足细胞代谢的需要，可在培养基中加入的天然成分是_______________。
(3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的______设计引物，利用__________技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有______________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的______________，用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验。
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(12分)【生物——现代生物科技专题】
阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。
回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程的范畴。构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。
（2）构建的表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是________________________将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用 法。
（3）资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴。鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞， 在诱导剂的作用下与________融合，形成____________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。 这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于__________________________，可大量制备。
（4）与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用__________诱导融合。
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【生物一一选修3:现代生物科技专题】某些适应寒冷环境的生物，能够产生一类抑制冰晶生长（能降低水溶液冰点的大分子）的蛋白质，即抗冻蛋白。科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）基因的异源表达，现已成功地提高了双子叶植物——烟草的抗冻能力。请分析回答下列相关问题：
（1）为使抗冻蛋白基因在烟草细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的抗冻蛋白基因片段正确插入基因表达载体的 和 之间。
（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核糖核苷酸和DNA模板，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
（3）将AFPS基因导人烟草细胞中，常用 法，此操作过程中使用的载体是 。若要检测烟草是否产生了抗冻蛋白，一般采用 法检测杂交带。
（4）假如用得到的二倍体转基因抗冻植株自交，子代中杭冻与不抗冻植株的数量比为15:1,可推测该杭冻基因整合到了 （填“一对同源染色体的一条上”“两条非同源染色体上．”或“一对同源染色体的两条上”）。
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（生物——选修3现代生物科技专题）
材料一 科学家巳培育出能够完全抵御一种毁灭性和致命性病毒的“超级猪”。这种转基因猪不会感染“猪蓝耳病”（由能够引发严重呼吸问题的病毒感染所致）。
材料二 世界上第二个“三亲宝宝”于2017年1月5日出生。为了避免夫妻把生理缺陷遗传给孩子，医生去除女性捐赠者的卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育。这样诞生的孩子将会继承一位父亲和两位母亲的遗传基因。
（1）结合材料一回答下列问题：①PCR扩增抗病毒基因时使用的酶是________。迄今为止，_______是转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。②代孕猪对移入子宫的外来胚胎基本上不发生___________，这为转基因猪胚胎在代孕猪体内存活提供了可能。在进行转基因猪胚胎移植时，要对受体猪进行___________处理。在胚胎移植前，通过___________技术可获得较多转基因猪胚胎。
（2）结合材料二回答下列问题：①分析材料可得出，“三亲宝宝”是为了治疗__________（填：细胞核基因/细胞质基因）有缺陷的患者。②_______的精子和培养成熟的卵子，一般情况下都可以在_________溶液中完成受精过程。精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查________。
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[生物——选修3，现代生物科技专题]利用基因工程可以治疗有基因缺陷的疾病。基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如下图：
(1)该项工程中目的基因的获取可以利用PCR技术，依据_________设计引物，利用_______为原料在PCR仪中进行扩增。
(2)该项基因工程的关键环节是需要构建含有Rag2基因的_______________.
(3)图中步骤①中所选的卵母细胞应处于___________期。而ES细胞一般从发育到________时期的
重组胚胎中分离获取。
(4)转化成功的ES细胞具有的结构特点是_______________。为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行________________。
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【生物一选修3:现代生物科技专题】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：
(1)过程②利用的技术是_______________,过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体
细胞的是_______________。
(2)过程③中获取的目的基因是_______________，可以根据该基因的____________.设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成 Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有_______和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。
(3)图中造血干细胞中的遗传物质至少有 __________来源。为检测 Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用_________________进行杂交实验。图中所述克隆技术属于_______克隆。
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【生物一选修3:现代生物科技专题】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：
(1)过程②利用的技术是_______________,过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体
细胞的是_______________。
(2)过程③中获取的目的基因是_______________，可以根据该基因的____________.设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成 Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有_______和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。
(3)图中造血干细胞中的遗传物质至少有 __________来源。为检测 Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用_________________进行杂交实验。图中所述克隆技术属于_______克隆。
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（生物——选修3：现代生物科技专题）科研人员利用“基因敲除技术”敲除了新生小鼠心肌细胞中的GATA4基因，结果发现一个分泌型因子FGF16的表达水平降低，小鼠心脏丧失了再生能力，并出现了严重的心肌肥大现象。紧接着科研人员利用腺相关病毒载体AAV9，实现了在心肌细胞中“过表达”Fgfl6基因，发现心肌细胞恢复增殖能力，心肌肥大也受到一定的抑制。这项工作为心肌损伤修复和病理性心肌肥大的临床治疗提供了理论基础。请回答：
（1）“基因敲除”和“基因工程”技术所依赖的生物学原理是________________。
（2）腺相关病毒载体AAV9作为基因工程的工具，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有_____________、______________（答出两点即可）的条件。
（3）目的基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。已知限制性内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—。请画出目的基因被限制性内切酶I切割后所形成的黏性末端________________。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列是否有专一性要求？________________。
（4）定性的检测目的基因的“过表达”产物可采用_____________的方法。
（5）资料说明：_____________、基因与基因产物、基因与环境之间存在着复杂的相互作用，这种相互作用形成了一个错综复杂的网络，精细地调控的生物体的性状。
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