（18分）为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后...

（14分）根据提供的材料，回答以下问题：

Ⅰ.为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

（1）表中数据表明，D基因失活使　　　　　 配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将D基因作为目的基因，与载体连接后，导入到　　　　　　　 （填“野生”或“突变”）植株的幼芽中，再经过　　　　　　 形成愈伤组织，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。

（2）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，所获得的F2植株的基因型及比例为　　　　　　　　　　　　 。

Ⅱ. 公园绿地是城市生态系统的重要组成部分，也是居民的主要休闲娱乐场所，是反映居民生活质量、环境质量和建设生态型城市的重要指标。

（1）某生态小组为了研究开园后的环境变化和生物多样性情况，开展了一定的调查。你认为调查植物种群密度常用的方法样方法，在取样时　　　　　　　 、　　　　　　　　 等因素会对调查结果产生影响。

（2）对该绿地的四个物种食物组成进行观察和记录，结果如下表：

若物种乙增加100kg，则至少消耗植物　　　　　　　　 kg。

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为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

（1）表中数据表明，D基因失活使________配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将________作为目的基因，导入到________（填“野生”或“突变”）植株的幼芽形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。

（2）用________观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的________分裂。

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为________，所获得的F2植株的基因型及比例为________。

（4）为验证F2植株基因型及比例，研究者根据D基因、T-DNA的序列，设计了3种引物，如下图所示：

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）。若________，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例。

（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内。为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合作为________对照。再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果________，则表明D蛋白是核蛋白。

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为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

（1）表中数据表明，D基因失活使________配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将________作为目的基因，导入到________（填野生或突变）植株的幼芽形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。

（2）用光学显微镜观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，结果表明无差异，则说明D基因失活不影响二者的________分裂。

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为________。

（4）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内。为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合，同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合作为标准对照，再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果________________________，则表明D蛋白是核蛋白。

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（10分）为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

（1）表中数据表明，D基因失活使________配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将________作为目的基因，与载体连接后，导入到________（填“野生”或“突变”）植株的幼芽经过________形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。

（2）用________观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的________分裂。

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为________，所获得的F2植株的基因型及比例为________。

（4）为验证F2植株基因型及比例，研究者根据D基因、T-DNA的序列，设计了3种引物，如下图所示：

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）。若________，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例。

（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内。为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合。再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果________，则表明D蛋白是核蛋白。

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（18分）为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

（1）表中数据表明，D基因失活使________配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将________作为目的基因，与载体连接后，导入到________（填“野生”或“突变”）植株的幼芽经过________形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。

（2）用________观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的________分裂。

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为________，所获得的F2植株的基因型及比例为________。

（4）为验证F2植株基因型及比例，研究者根据D基因、T-DNA的序列，设计了3种引物，如下图所示：

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）。若________，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例。

（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内。为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合。再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果________，则表明D蛋白是核蛋白。

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（2015秋•长春校级月考）为研究水稻D基因的功能，研究者将T﹣DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d．现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示．

（1）表中数据表明，D基因失活使　　　　 配子育性降低．为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将　　　　 作为目的基因，与载体连接后，导入到　　　　 （填“野生”或“突变”）植株的幼芽经过　　　　 形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复．

（2）用　　　　 观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的　　　　 分裂．

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降．若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为　　　　 ，所获得的F2植株的基因型及比例为　　　　 ．

（4）为验证F2植株基因型及比例，研究者根据D基因、T﹣DNA的序列，设计了3种引物，如图所示：

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T﹣DNA过大，不能完成PCR）．若　　　　 ，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例．

（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内．为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合．再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果　　　　 ，则表明D蛋白是核蛋白．

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为了研究拟南芥的基因A、B在减数分裂中的功能，研究人员开展了如下实验。

（1）通过_________法将含卡那霉素抗性基因的T-DNA插入到野生型（AABB）拟南芥基因组中，在含_________的培养基中培养，筛选得到基因型分别为AaBB和AABb的单突变体。

（2）将上述得到的两种单突变体杂交得到F1，F1中具有卡那霉素抗性的植株占_____。将具有卡那霉素抗性的F1分单株种植，收获F2单独统计，若F2中抗性：不抗性=15:1，则说明F1的基因型为_____, 其F2抗性植株中纯合子的比例为_____。

（3）F2中各植株的茎叶相似，无法区分。为进一步筛选得到F2中的突变体纯合子，提取F2抗性植株的叶片DNA，分别用引物“P1+ P3”组合及“P2+P3”组合进行PCR，检测是否扩增，鉴定原理如下图所示。（插入T-DNA的A基因过大，不能完成PCR）若_________，则相应植株为抗性纯合子aa。依据同样的原理，可得到bb。

（4）下图为两种突变体拟南芥减数分裂过程中的染色体行为变化。据图推测，基因A和B的突变会导致减数分裂发生的变化分别是_________和_________。

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为研究野生型拟南芥抗盐机理，研究人员利用T-DNA插入拟南芥基因组中，得突变体Y。

（1）种植野生型拟南芥，将地上部分浸入______菌悬浮液中以实现转化，该菌的T-DNA上需带有抗除草剂基因以便筛选。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。

（2）假设所处理植株为T-DNA单拷贝插入，则T1代植株自交后所结种子中具有抗除草剂性状的占______。继续种植具有抗除草剂性状的种子，长成植株后进行自交，若______，表明获得了纯合的转基因突变体植株Y。

（3）野生型拟南芥的抗盐性状与D基因密切相关，T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。收集上述突变体Y叶片并提取DNA，分别用引物“LB+RP”组合及“LP+RP”组合进行PCR扩增。已知插入完整T-DNA后，“LP+RP”不能完成PCR扩增如图．检测扩增结果中，若______，则相应植株的基因型为Dd；若______，则相应植株的基因型为dd。

（4）研究人员收集7个突变体的叶片，提取叶片总mRNA，并逆转录为cDNA，利用特异性引物进行PCR扩增，结果如图．基因actin在拟南芥中表达相对稳定，作为本实验的______，结果表明______号植株因T-DNA的插入，D基因完全沉默。

（5）将野生型和突变体种子消毒后，分别播种于含有不同浓度NaCl培养基中，观察种子萌发情况，结果见如图．

由如图可知，在不含NaCl的培养基上，野生型和突变体种子的萌发率______；随着NaCl浓度的升高，突变体种子的萌发率明显______。

（6）野生型在高浓度NaCl胁迫下，脱落酸（ABA）含量增加，并迅速参与到抗胁迫的反应中。突变体D基因由于T-DNA的插入不能正常表达，导致突变体的抗盐性下降，由此推测D基因抗盐作用的机理是______。

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研究者向野生型香豌豆的核基因中随机插入一段含有n个脱氧核苷酸的DS片段（含卡那霉素抗性基因），通过培养得到变异型香豌豆植株。因插入导致某一基因（M）的功能丧失，从变异型香豌豆的表现型可推测基因M的功能。下列相关叙述正确的是

A． 变异发生后基因M编码的氨基酸将增加n／6个

B．插入过程中需要限制酶和RNA聚合酶的催化

C． 变异型植株的产生能为生物的进化提供原材料

D． 插入将会导致基因M中A／T的比例发生改变

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水稻穗粒数可影响水稻产量。研究者筛选到一株穗粒数异常突变体，并进行了相关研究。

（1）农杆菌Ti质粒上的T-DNA序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的__________中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体。

（2）研究者分别用EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶处理突变体的总DNA，用HindⅢ处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T-DNA片段）进行杂交，得到如图所示放射性检测结果。

①由于杂交结果中_____________________，表明T-DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T-DNA上没有EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶的酶切位点）

②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于_____________________________不同。

③由实验结果判断突变体为T-DNA单个位点插入，依据是____________________。

（3）研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用_______将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用图中的引物________组合进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T-DNA插入了2号染色体上的B基因中。

（4）研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_____（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。

（5）育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的是（_________）。

a．对水稻品系2进行60Co照射，选取性状优良植株

b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株

c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株

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