下图1表示含目的基因的DNA片段，图2表示质粒（巳知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：
（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5＇端向3＇端延伸。利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有______________(从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。上述过程中，经过__________次循环后会产生双链等长的目的基因片段。
（2）要保证目的基因能与图2中的质粒连接，要将（2）中选出的两种引物的5＇端分别添加上________两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入到含大肠杆菌的转化液中。要从中分离出含该重组质粒的大肠杆菌单菌落，请简述操作思路将转化液接种在__________的固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间后，___________。
（3）从DNA分子结构分析，上述操作用到的工具酶作用的共同点是______________。
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下图1表示含目的基因的DNA片段，图2表示质粒（巳知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：
（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5＇端向3＇端延伸。利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有______________(从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。上述过程中，经过__________次循环后会产生双链等长的目的基因片段。
（2）要保证目的基因能与图2中的质粒连接，要将（2）中选出的两种引物的5＇端分别添加上________两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入到含大肠杆菌的转化液中。要从中分离出含该重组质粒的大肠杆菌单菌落，请简述操作思路将转化液接种在__________的固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间后，___________。
（3）从DNA分子结构分析，上述操作用到的工具酶作用的共同点是______________。
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下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：
（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶是_________。
（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入________酶用以催化互补链的合成。
（3）过程④所用的酶是___________________________。
（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含__质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是______。
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下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：
（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶是_________。
（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入________酶用以催化互补链的合成。
（3）过程④所用的酶是___________________________。
（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含__质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是______。
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下图甲表示限制酶EcoR I的识别序列和切割位点，图乙表示DNA片段，图丙表示质粒及限制酶的切割位点。下列分析正确的是（ ）
A.目的基因被EcoR I切割后将产生序列为—TTAA的平末端
B.限制酶作用于图乙中的①，DNA连接酶作用于②和③
C.用HindⅢ和Pst I两种限制酶切割质粒，不会影响含目的基因的受体细胞的筛选
D.用PstI和EcoR I两种限制酶切割质粒，有利于目的基因与质粒正确连接
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根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和 ．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 ．
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶．
（4）反转录作用的模板是 ，产物是 ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术．
（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体．
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 ．
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不属于目的基因与运载体结合过程的是（ ）
用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处
D．将重组DNA导入受体细胞中进行扩增
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不属于目的基因与运载体结合过程的是（ ）
用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处
D．将重组DNA导入受体细胞中进行扩增
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不属于目的基因与运载体结合过程的是（ ）
A．用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处
D．将重组DNA导入到受体细胞进行扩增
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不属于目的基因与运载体结合过程的是( )
A.用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B.用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
C.将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处
D.将重组DNA导入到受体细胞进行扩增
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质粒A和质粒B各自有一个限制酶EcoR I和限制酶BamH I的识别位点，两种酶切割DNA产生的黏性末端不同。限制酶EcoR I剪切位置旁边的数字表示其与限制酶BamH I剪切部位之间的碱基对数(bp)。在含有质粒A和B的混合溶液中加入限制酶EcoR I和BamH I，令其反应充分；然后，向剪切产物中加入DNA连接酶进行反应，再将其产物导入大肠杆菌中。（实验中不考虑：无ori的质粒；拥有两个或以上ori的质粒；两个或以上质粒同时进入大肠杆菌；三个或以上DNA片段发生连接）请回答下列问题：
（1）只拥有质粒A的大肠杆菌________（填“可以”或“不可以”）在含有氨苄青霉素及乳糖作为唯一碳元素来源的培养基中生存？说明理由____________。
（2）DNA连接酶进行反应后，存在________种大小不同的质粒，有________种质粒使大肠杆菌能够在含有氨苄青霉素及乳糖作为唯一碳源的培养基中生存。
（3）绿色荧光蛋白基因是标记基因一种，标记基因的功能是________。
（4）质粒导入大肠杆菌通常要用________处理，其作用是________。
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