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2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。这项技术为家猪的目标育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪提供了可靠技术平台。结合基因工程技术和胚胎工程技术回答问题：
（1）基因工程是在________水平上进行设计和施工的，实现操作过程至少需要三种工具，即________、________和载体。
（2）若想获取转基因克隆猪的目的基因可从基因文库中获取、________技术扩增及DNA合成仪人工合成。
（3）基因工程的核心是 ________。
（4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射________的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到________期即可通过显微操作将其细胞核去除。
（5）若对获得的转基因克隆猪作检测与鉴定，首先要检测的是________，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键。
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(7分)我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
(1)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿等才能构成一个完整的基因表达载体。
(2)将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除并形成重组细胞，然后再通过＿＿＿＿＿＿＿＿技术培养成早期胚胎。
(3)早期胚胎的培养液成分较复杂，人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，通常加入＿＿＿＿等一些天然成分。
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我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
（1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和________________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA或RNA）。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。
（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含一定量CO2的培养箱中进行培养，CO2的作用是_____________。
（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。
（5）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。
A.动物细胞培养 B.胚胎移植
C.胚胎细胞核移植 D.DNA重组技术
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（每空1分，共10分）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
（1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和________
__________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA/RNA）。（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。
（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含________________________________的混合气体培养箱中进行培养。
（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。
（5）去核的卵母细胞与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。利用物理或化学方法刺激重组细胞，使之完成细胞______________________________，在体外培养成重组早期胚胎。
（6）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________________处理。
（7）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。
A.动物细胞培养 B.胚胎移植
C.胚胎细胞核移植 D.DNA重组技术
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(11分)．日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。获取绿色荧光蛋白基因常用的三种方法是______________________________________。
图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有__________________等。(至少答出三项)
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（8分）日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：
（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________ _________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
（5）在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和___等。
（6）以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出2项）。
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因和质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性末端：______________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因和质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性末端：______________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是______________________________________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_________________________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)
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美籍华裔科学家钱永键和日本海洋生生学家下村修等人因在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面的突出贡献，获得了2008年诺贝尔化学奖。下图是我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)图中通过①、②过程形成重组质粒，需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒。限制酶的特点是________。
(2)③过程将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是________。
(4)以上培育过程中应用到的生物技术主要有________、________、________等。(写三项即可)
(5)④过程形成重组细胞时应用________期的卵母细胞，去掉其细胞核的原因是。
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