甲、注意，此题仅3、4、5、6、7、8班做大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。...

甲、注意，此题仅3、4、5、6、7、8班做

大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答问题。

(1)对已获得的目的基因可利用________技术进行扩增。

(2)目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复________键。

(3)将试管Ⅰ中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是________；大肠杆菌需事先用Ca2＋进行处理，目的是________________。

(4)将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上，培养基中加入氨苄青霉素的作用是筛选出________。

(5)若观察到培养基上出现________色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是________________

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ 基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ 基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法正确的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制性核酸内切酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。关于图操作的说法错误的是（　　 ）

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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（10分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β－半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X－ gal时，X－gal便会被β－半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β－半乳糖苷酶，培养基中的X－gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：

（1）作为受体大肠杆菌应___________（2分）以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理(增加其细胞壁的通透性)过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入__________________。（2分）

（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________（2分）等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果（4分）

①______________________________________________________________________。

②___________________________________________________　　　　 _____________。

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大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：

（1）作为受体大肠杆菌应_____________（填“含有”或“不含有”）氨苄青霉素抗性基因，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（增加其细胞壁的通透性）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，完成基因工程操作的________步骤（具体步骤）。如果受体细胞是植物细胞，则通过________转化作用将目的基因导入受体细胞，因为其Ti质粒中的T—DNA有________特点。

（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：

①________。

②________。

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下列关于基因工程的叙述中，错误的是

A．基因工程常用的运载体包括细菌的质粒、噬菌体、动植物病毒

B．将目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是用Ca2+处理细胞

C.基因工程中的工具酶有限制酶和DNA连接酶

D．基因治疗是把有基因缺陷的细胞中的缺陷基因剔除后再导入健康的外源基因

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下列关于基因工程的叙述中，错误的是

A.基因工程常用的运载体包括细菌的质粒、噬菌体、动植物病毒

B.将目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是用Ca2+处理细胞

C.基因工程中的工具酶有限制酶和DNA连接酶

D.基因治疗是把有基因缺陷的细胞中的缺陷基因剔除后再导入健康的外源基因

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