大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中...

大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ 基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ 基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法正确的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。如图表示转基因操作过程，下列说法错误的是

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制性核酸内切酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。关于图操作的说法错误的是（　　 ）

A. 作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选

B. 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌

C. 培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

D. 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养

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天然大肠杆菌质粒一般含有lacZ基因而不含氨苄青霉素抗性基因；人工合成的大肠杆菌puc118质粒中含有lacZ基因外，还含有含氨苄青霉素抗性基因。若lacZ基因完整，便可表达出α-半乳糖苷酶，α-半乳糖苷酶能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落圈；若lacZ基因中插入了外源基因，带有puc118质粒的大肠杆菌便不能表达α-半乳糖苷酶，将形成白色菌落。此实验方法可以用于鉴别转基因实验是否获得成功。

（1）目的基因是_____________________________。

（2）过程③④需要________________________酶。

（3）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需营养成分外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（4）检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒。培养一段时间后出现三种类型：菌落处有蓝色、菌落处有白色、菌落不能生长。成功导入重组质粒的菌落圈的表现是______________。

有些菌落在该培养基中不能生长，原因是_____________________________________。

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（10分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β－半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X－ gal时，X－gal便会被β－半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β－半乳糖苷酶，培养基中的X－gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：

（1）作为受体大肠杆菌应___________（2分）以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理(增加其细胞壁的通透性)过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入__________________。（2分）

（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________（2分）等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果（4分）

①______________________________________________________________________。

②___________________________________________________　　　　 _____________。

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大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：

（1）作为受体大肠杆菌应_____________（填“含有”或“不含有”）氨苄青霉素抗性基因，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（增加其细胞壁的通透性）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，完成基因工程操作的________步骤（具体步骤）。如果受体细胞是植物细胞，则通过________转化作用将目的基因导入受体细胞，因为其Ti质粒中的T—DNA有________特点。

（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：

①________。

②________。

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质粒PUC19上有氨苄青霉素抗性基因和牙半乳糖苷酶基因（LacZ基因）。细胞中有β—半乳糖苷酶时能利用乳糖，产生的有机酸使指示剂变红，形成红色菌落；没有β—半乳糖苷酶时只能利用其他碳源，在培养基上形成白色菌落。下图为含目的基因的DNA片段，LacZ基因中有EcoRⅠ、SacⅠ和XbaⅠ三种限制酶的切点，回答下列问题：

（1）用EcoRⅠ切割目的基因和质粒PUC19后，将多个含有目的基因的DNA片段和切割后的质粒用DNA连接酶连接后，能形成___________种产物。为了防止质粒和目的基因的自身环化，应选择限制酶___________切割质粒和含目的基因的DNA片段。

（2）为了筛选成功导入重组DNA分子的受体菌，应首先将受体菌置于含有___________（抗生素）的培养基上进行初步筛选，然后将存活的受体菌转入含有___________和其它有机碳源的培养基上培养，菌落颜色为___________的即为成功导入重组DNA分子的细菌。

（3）大肠杆菌作为受体细胞，导入重组DNA分子前要用一定浓度的CaCl2溶液处理，其目的是_________。

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大肠杆菌PUC19质粒如下图所示。LacZ基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解x-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRI构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因）并进行检测。下列叙述错误的是

A. 检测前用稀释涂布平板法接种受体菌

B. 培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal

C. 挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌

D. 应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养

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