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基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列，在特定位点上进行替换，从而改变细胞遗传特性的方法。该技术可应用于解决人体对移植的猪器官产生的免疫排斥反应上，即利用基因打靶技术对猪细胞α-1，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，以消除α-1，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥。其主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞。
第二步：在与靶基因（需要改造的基因）相同的外源性DNA上，插入新霉素抗性基因，构建打靶载体。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与细胞DNA中的靶基因进行替换。
第四步：改造后的胚胎干细胞筛选、增殖等。
回答下列问题：
（1）选取猪胚胎干细胞作为基因改造的细胞，原因是胚胎干细胞在功能上具有______。
（2）该改造过程中，靶基因具体是指______；插入新霉素抗性基因需要的酶是______，插入该抗性基因的作用是______（答出两点）。
（3）改造后的胚胎干细胞经过诱导发生增殖和______分化，培育出不合成α-1，3半乳糖苷转移酶的特定器官，再经过一系列改造后为器官移植做准备。
（4）运用基因打靶技术进行基因改造的原理是______，该技术在一定程度上解决了人体移植器官的短缺难题。
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基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列，在特定位点上进行替换，从而改变细胞遗传特性的方法。该技术可应用于解决人体对移植的猪器官产生的免疫排斥反应，即利用基因打靶技术对猪细胞ɑ—1，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，以消除ɑ—1，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥。其主要过程如下：
第二、三步示意图（6—10表示不同的基因片段）
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞。
第二步：在与靶基因（需要改造的基因）相同的外源性DNA上，插入新霉素抗性基因，构建打靶载体。
第三步：打耙载体导入胚胎干细胞，与细胞DNA中的靶基因进行替换。
第四步：改造后的胚胎干细胞筛选、增殖等。
回答下列问题：
（1）上述改造过程中的靶基因是_______________，插入新霉素抗性基因的过程中需要用到的酶有___________，插入新霉素抗性基因的目的是____（答出2两点）。
（2）基因打靶技术依据的遗传学原理是_____________。
（3）除囊胚外，胚胎干细胞还可以来自于______阶段的胚胎和________。胚胎干细胞具有的显著特点是___________________。
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基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列，在特定位点上进行替换，从而改变细胞遗传特性的方法。该技术可应用于解决人体对移植的猪器官产生的免疫排斥反应上，即利用基因打靶技术对猪细胞α—1，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，以消除α—1，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥。其主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞。
第二步：在与靶基因（需要改造的基因）相同的外源性DNA上，插入新霉素抗性基因，构建打靶载体。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与细胞DNA中的靶基因进行替换。
第四步：改造后的胚胎干细胞筛选、增殖等。
回答下列问题：
（1）选取猪胚胎干细胞作为基因改造的细胞，原因是胚胎干细胞在功能上具有______。
（2）该改造过程中，靶基因具体是指______；插入新霉素抗性基因需要的酶是______，插入该抗性基因的作用是______（答出两点）。
（3）改造后的胚胎干细胞经过诱导发生增殖和______分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的特定器官，再经过一系列改造后为器官移植做准备。
（4）运用基因打靶技术进行基因改造的原理是______，该技术在一定程度上解决了人体移植器官的短缺难题。
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基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列，在特定位点上进行替换，从而改变细胞遗传特性的方法。该技术可应用于解决人体对移植的猪器官产生的免疫排斥反应上，即利用基因打靶技术对猪细胞α—1，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，以消除α—1，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥。其主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞。
第二步：在与靶基因（需要改造的基因）相同的外源性DNA上，插入新霉素抗性基因，构建打靶载体。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与细胞DNA中的靶基因进行替换。
第四步：改造后的胚胎干细胞筛选、增殖等。
回答下列问题：
（1）选取猪胚胎干细胞作为基因改造的细胞，原因是胚胎干细胞在功能上具有______。
（2）该改造过程中，靶基因具体是指______；插入新霉素抗性基因需要的酶是______，插入该抗性基因的作用是______（答出两点）。
（3）改造后的胚胎干细胞经过诱导发生增殖和______分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的特定器官，再经过一系列改造后为器官移植做准备。
（4）运用基因打靶技术进行基因改造的原理是______，该技术在一定程度上解决了人体移植器官的短缺难题。
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基因编辑是指将外源DNA片段导入到细胞染色体特定位点或删除基因内部的片段，定点改造基因，获得预期的生物体基因序列发生遗传改变的技术。下图是对某生物B 基因进行编辑的过程，该过程中用sgRNA可指引核酸内切酶Cas9结合到特定的切割位点，下列叙述正确的是
A. sgRNA是合成Cas9酶的模板
B. sgRNA的碱基序列与靶基因碱基序列能够全部互补
C. 核酸内切酶Cas9可在特定切割位点断裂核苷酸之叫的磷酸二酯键
D. B基因被编辑后因不能转录而无法表达相关蛋白质
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Cre/loxP重组酶系统是对转基因受体细胞DNA上的特定序列进行定点切割和重新连接，从而在基因或染色体水平上对生物基因进行遗传改造的一种技术。其原理是重组酶Cre能识别loxP位点（特定的DNA序列），并使loxP位点间的基因序列被重组或删除。受此启发，科学家在检测抗虫基因成功导入烟草细胞后，尝试用Cre/loxP重组酶系统删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因，其技术过程如图2（其中■表示启动子）。
（1）通过基因改造获得抗虫烟草过程中，为大量获得抗虫基因，可选择图1中引物___________（用图中罗马数字表示）组合进行PCR扩增；扩增时，为确保抗虫基因和表达载体充分连接，常在基因上、下游引物的___________端添加不同的限制酶切位点，其目的是______________________。
（2）loxP是一种含34个碱基对的小型DNA片段，由一个不对称的间隔区和两个反向重复序列组成。Cre酶能特异性地识别反向重复序列并于特定位置切开磷酸二酯键，类似于基因工程中的___________酶，从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒的原理是____________。
（3）通常用___________法把携带抗虫基因的重组质粒甲导入烟草细胞，经检测导入成功后，抗除草剂基因即失去用途，继续留在烟草体内可能会引发的生物环境安全问题是_______________________。
（4）经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开，得到图2右侧的两个环状DNA分子。由于______________________，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失。
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利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄，该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点，
请回答：
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_________，切割后产生了_________末端。
（2）利用EcoR I 和Nae I酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoR I 和Sam I酶切后的质料连接成重组质料，原因是______________________________________________________。
（3）重组质粒导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用_________作探针。
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的_________，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此，还应将转基因番茄_________，以确定其耐寒能力是否提高。
（5）应用PCR扩增目的基因时，需要在基因组数据库中查询目的基因的_________序列，以便合成引物。PCR过程第一轮循环的模板是____________________________________。
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利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄.该过程需要用多种限制酶,下图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点.
请回答:
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA,其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______切割后产生了____________末端.
（2）利用EcoR I 和NAE 酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因,可与被EcoR I 和Sam I酶切后的质料连接成重组质料,原因是___________
（3）重组质料导入番茄后,欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA,需利用__________作探针.
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的__________,然后进行抗原-抗体杂交,观察到杂交带出现,尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功.因此,还应将转基因番茄__________,以确定其耐寒能力是否提高.
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利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄。该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点。
请回答：
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的____________，切割后产生了_____________。
（2）利用EcoR I和Nae I酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoR I和Sam I酶切后的质粒接成重组质粒，原因是__________________。
（3）重组质粒可用_____________法导入番茄后，应将转基因番茄植株________________________，以确定其耐寒能力是否提高，若没有提高，根据中心法则分析，可能原因是________________________。
（4）欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用______________________作探针。应用PCR扩增目的基因时，需要在基因组数据库中查询目的基因的_____________，以便合成引物。
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“基因靶向”技术是指利用细胞脱氧核糖核酸（ DNA ）可与外源性 DNA 同源序列发生同源重组的性质，定向改造生物某一基因的技术。有科研小组通过下图所示的“基因靶向”技术将小鼠棕褐色的毛色基因导入黑色纯种小鼠细胞的 ES 细胞中。以下说法错误的是
A．ES 细胞来自第 3.5 天小鼠囊胚中的A细胞，理论上该细胞在功能上具有发育的全能性
B．在胚胎移植过程中，供、受体动物选择好后，要用激素进行同期发情的处理，使供、受体的生理状态相同，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。
C．该实验得到的带突变基因的嵌合体小鼠体内有3种基因型的体细胞。
D．取患者的淋巴细胞（脐带血细胞）作为受体细胞，插入正常的外源基因后，再回输体内，以替代、修复或纠正有缺陷的基因，这种方法称为基因治疗；但如果外源基因随机插入，会因位置效应引起紊乱，而“基因靶向”技术很好地解决了这一问题。