为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF 转移到大...

为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF 转移到大豆植株中，下图为重组Ti质粒上T-DNA的序列结构示意图。下列相关叙述不正确的是

A. 以水稻RNA为模板通过逆转录及PCR扩增可获得大量OsPTF基因

B. RNA聚合酶与启动子I识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录

C. 可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的的基因大豆愈伤组织

D. 用EcoRI、BamHI双酶切重组Ti质粒后，经电泳分离至少得到两条带

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为了提高水稻的抗倒伏能力，科研人员从其他植物中得到矮杆基因C（图1），将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入水稻中。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）用__________构建重组质粒；一般使用__________将重组质粒导入农杆菌。

（2）用含C基因的农杆菌侵染水稻的__________，将C基因导入细胞；在培养基中添加__________，筛选被转化的水稻细胞；要得到相应的水稻植株，要利用__________。

（3）用__________检测C基因是否整合到染色体上；此外，还需要在个体水平上进行检测。如果检测显示C基因整合到染色体上，但水稻并没有矮化，请分析可能的原因：__________；__________。（至少答两点）

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育种工作者从高粱的基因组中分离出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（Ppc基因），利用农杆菌介导的转化系统将其转入水稻体内，以提高水稻的光合效率。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ四种限制酶切割位点。请回答下列相关问题：

（1）基因工程的核心步骤是　　　　　　　　 ；构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶　　　　　　　 分别对含Ppc基因的DNA和质粒进行切割，再用　　　　 使其连接。构建的表达载体A除含有目的基因、标记基因外，还应有　　　　　　　　　　　 。

（2）欲在体外获得大量的Pc基因，常采用　　　　　　 技术，其中所用的酶的特点是　　　　　　 。

（3）水稻组织细胞具有　　　　　　　　　 ，因此，可以利用　　　　　　　　 技术将导入Ppc基因的水稻组织细胞培养成植株。

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（11分）Ti质粒来源于土壤中的脓杆菌，Ti质粒能成功转入植物细胞，并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的基因组中。下图表示利用Ti质粒进行转化获得抗除草剂大豆的过程。请据图回答下列问题（数字表示有关过程）。

（1）获得含目的基因ＤＮＡ的方法一般有两种即：　 和　 。

（2）Ti质粒分布于脓杆菌细胞的________部分，从其化学本质上看属于________分子。

（3）据图可知，重组质粒导入的受体大豆细胞处于________（未分化 / 已分化）状态，若要通过过程④获得愈伤组织并进一步得到大豆幼苗，需将该受体细胞置于________

________条件下进行培养，并适时调整________（植物激素名称）的浓度比例进行诱导。

（4）过程④运用了细胞工程中的________技术，该技术的理论依据是________。

（5）上图获得的幼苗在移栽至大田种植的初期，由于幼苗吸水能力差，生理功能较弱，需要控制好________等环境条件（写出两种），待幼苗健壮后再使其在常规条件下生长。

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磷转运体Q蛋白家族在植物吸收磷元素中发挥重要作用，编码该蛋白家族的基因种类繁多（如Q1、Q2和Q3等）。为通过转基因技术提高紫花苜蓿的耐低磷能力，需筛选出低磷条件下高表达Q蛋白基因（高表达基因对应mRNA的量在细胞中也高）。回答下列问题。

（1）RT-PCR是以mRNA作为模板扩增得到DNA的技术，与传统PCR相比，进行RT-PCR时需额外添加的酶是________，反应体系中已存在不同Q蛋白对应mRNA、dNTP和所需的酶，要得到不同的Q蛋白基因，还需在反应体系中加入________。利用RT-PCR技术能筛选出高表达基因，推测其判断指标是________。

（2）将目的基因转入紫花苜蓿叶片细胞的常用方法是________，该方法需先将目的基因整合到Ti质粒的________中，由此，目的基因可整合到紫花苜蓿叶片细胞的染色体上。紫花苜蓿叶片细胞可通过________技术培养得到完整植株，其依据的原理是________。

（3）科学家将绿色荧光蛋白基因连接到筛选所得的目的基因之后，构建得到基因表达载体（两基因共用启动子和终止子，表达产物既能实现Q蛋白功能也能发绿色荧光），导入受体细胞一段时间后，可观测到细胞膜上呈现绿色荧光，说明________。这与目的基因的表达产物在细胞吸收磷元素中所发挥的作用相吻合。

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北方寒冷地区为了延长大豆的生长时间来提高产量，科学家采用农杆菌转化法将一种抗冻蛋白基因成功导入大豆细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

（1）用农杆菌感染时，应优先选用大豆____________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是___________________。

（2）植物基因工程常采用农杆菌转化法是因为农杆菌细胞中的Ti质粒上有一段特殊序列称为_____________，其特点是_________________________________________。

（3）若要检测转基因大豆中是否产生这种抗冻蛋白，采用的方法是_______________。即使检测出抗冻蛋白也还需进行个体水平鉴定，可以采用的方法为__________。

（4）通常基因工程操作主要有4个步骤，核心步骤是________________。基因工程的定义可以概括为______________________________________________________。

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北方寒冷地区为了延长大豆的生长时间来提高产量，科学家采用农杆菌转化法将一种抗冻蛋白基因成功导入大豆细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

（1）用农杆菌感染时，应优先选用大豆____________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_________________________ 。

（2）植物基因工程常采用农杆菌转化法是因为农杆菌细胞中的Ti质粒上有一段特殊序列称为_____________，其特点是________________________________。

（3）若要检测转基因大豆中是否产生这种抗冻蛋白，采用的方法是_______________。若有_________，表明目的基因已形成蛋白质产品。即使检测出抗冻蛋白也还需进行个体水平鉴定，可以采用的方法为________________________________。

（4）通常基因工程操作主要有4个步骤，核心步骤是__________________。

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科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下列叙述错误的是

A．目前还不能用化学方法合成目的基因

B．可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞

C．含耐盐基因的水稻细胞可经植物组织培养获得植株

D．可用较高浓度的盐水浇灌来鉴定水稻植株的耐盐性

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利用农杆菌转化法可将抗虫基因导入玉米细胞而获得抗虫植株。下列说法正确的是

A.若对已知序列的抗虫基因进行大量扩增，应用PCR技术

B.将重组的农杆菌Ti质粒喷洒到玉米伤口上，可成功转化

C.利用害虫接种实验可从分子水平检测目的基因是否进入了玉米细胞

D.将抗虫基因导入细胞质可避免通过花粉传播进入其他植物

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水稻穗粒数可影响水稻产量。研究者筛选到一株穗粒数异常突变体，并进行了相关研究。

（1）农杆菌Ti质粒上的T-DNA序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的__________中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体。

（2）研究者分别用EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶处理突变体的总DNA，用HindⅢ处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T-DNA片段）进行杂交，得到如图所示放射性检测结果。

①由于杂交结果中_____________________，表明T-DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T-DNA上没有EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶的酶切位点）

②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于_____________________________不同。

③由实验结果判断突变体为T-DNA单个位点插入，依据是____________________。

（3）研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用_______将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用图中的引物________组合进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T-DNA插入了2号染色体上的B基因中。

（4）研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_____（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。

（5）育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的是（_________）。

a．对水稻品系2进行60Co照射，选取性状优良植株

b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株

c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株

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