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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

限制酶

BamH

Bcl

Sau3A

HindⅢ

识别序列及切割位点

G↓GATCC

CCTAG↑G

T↓GATCA

ACTAG↑T

↓GATC

CTAG↑

A↓AGCTT

TTCGA↑A

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用________和______两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于________态的大肠杆菌。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中________。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为_______,对于该部位,这两种酶_______(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。

高三生物实验题困难题

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