科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对于扰素基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图1:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______________________,常用的导入目的基因的方法为______________________。
(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为______________________。
(3)步骤③中,需要构建含有干扰素基因的______________________。已知DNA分子复制过程中,子链延伸的方向是从5′端→3′端,构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时,可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取______________________作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶的组合为______________________。
(4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达,可以采用______________________的方法。
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科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对于扰素基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图1:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______________________,常用的导入目的基因的方法为______________________。
(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为______________________。
(3)步骤③中,需要构建含有干扰素基因的______________________。已知DNA分子复制过程中,子链延伸的方向是从5′端→3′端,构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时,可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取______________________作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶的组合为______________________。
(4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达,可以采用______________________的方法。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 期时, 可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 期时, 可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 期时, 可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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(12分)【生物——现代生物科技专题】
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_________,此技术属于_________工程范畴。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其__________中分离出ES细胞。培养ES细胞时,为满足细胞代谢的需要,可在培养基中加入的天然成分是_______________。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的______设计引物,利用__________技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的______________,用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
请回答:
(1)步骤①中,核移植技术需要把供体细胞核和去除______的MⅡ中期卵母细胞构建成重组细胞,重组细胞经过动物细胞培养再发育成重组胚胎。
(2)ES细胞(胚胎干细胞)来源于早期胚胎和____,它在形态上的特性是____;在功能上的特性是_____。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。获取目的基因时,可以利用___技术扩增Rag2基因片段,该技术的前提是根据Rag2基因的______设计引物。
若果要用HindⅢ和Pst I限制酶分别在含Rag2基因的DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段,为将该片段和载体连接,所选择的载体上也应具有的酶切位点的限制酶种类是_____。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞中的________,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_______。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 ____期时,可从_______分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用_______扩增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______和_______的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_________________,用_______进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的__________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind?和Pst?限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_____酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_____,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_______。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 ____期时,可从_______分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用_______扩增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______和_______的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_________________,用_______进行杂交实验。
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_______。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 ____期时,可从_______分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用_______扩增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______和_______的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_________________,用_______进行杂交实验。
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