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（7分）基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。
请回答下列问题：
（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为，基因导入该细胞时，可以采用等方法。
（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是 。
（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血(Ⅱ型)模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：________。
（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是________。
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基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。
请回答下列问题：
（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为，基因导入该细胞时，可以采用等方法。
（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是 。
（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血（Ⅱ型）模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：________。
（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是________。
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基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。
请回答下列问题：
（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和▲等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是▲ 。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为▲，基因导入该细胞时，可以采用▲等方法。
（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是 ▲。
（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血(Ⅱ型)模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：▲ 。
（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录
形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是▲ 。
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敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因重组进行基因敲除是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如图所示。
请回答下列问题：
（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的运载体与之结合，形成的DNA分子称为______，在这个过程中所需的工具酶有______和____。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞应该是_____________。
（3）上述途径获得的动物，其后代是否都含目的基因。为什么？_______________________。
（4）以质粒为运载体，用同一种限制酶切割质粒和目的基因，在切割后的运载体与目的基因连接时，连接方式有________种。
（5）上述过程实现的重组类似于减数分裂中_________时期的______________现象。
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基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”的构建过程如下:
第一步,从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞(ES),在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”;
第二步,构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因(同源臂),在同源臂上接入neoR(新霉素抵抗基因)等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对,所以能像“准星”一样,将表达载体准确地带到靶基因的位置;
第三步,将表达载体导入胚胎干细胞,并与其内靶基因同源重组,完成胚胎干细胞的基因改造;
第四步,基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。基本原理如图所示。
请根据上述资料,回答下列问题。
(1)实施基因工程的核心步骤是__________,基因表达载体中的_____是位于基因首端的有特殊结构的DNA片段;在构建的过程中所需要的工具酶是________。
(2)如果要获得一只含目的基因的小鼠,则选择的受体细胞通常是______,原因是_____________。
(3)上述资料中neoR基因的作用最可能是________________。为了鉴定目的基因是否成功表达,有时进行抗原—抗体杂交,目的蛋白相当于____。
(4)该项技术具有广阔的应用前景,请试举一例:__________________。
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基因敲除技术是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除技术常用于建立某种特定基因缺失的生物模型。例如，基因敲除模式小鼠制备技术图解如下：
请回答：
（1）图中ES细胞（胚胎干细胞）存在囊胚的_______部位，它具有体积小、细胞核大、____________的特点。
（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表达载体的________和_________之间。
（3）转染ES细胞过程既可采用电穿孔法，亦可采用_________法。
（4）筛选中靶ES细胞需在动物细胞培养液中添加_____，图中字母X过程采用_____技术。
（5）嵌合鼠和白色纯合体小鼠交配产生的后代有___种表现型，其中黑色鼠是被破坏基因X的_____（填“纯合体”或“杂合体”）。
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基因敲除是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，其基本原理如右图所示。如果利用基因敲除的方法，将目的基因转入小鼠胚胎干细胞，经过一系列过程可获得目的基因稳定遗传的转基因小鼠。请回答下列问题：
（1）若要切割某DNA片断，如图所示,该限制酶能识别的碱基序列是__________，切点在_________之间。
（2）将目的基因转入小鼠胚胎干细胞后，胚胎干细胞能够发育成转基因小鼠，所依据的生物学原理是__________。胚胎干细胞在体外培养的条件下可以增殖而不发生________，还可通过体外定向诱导，培育出人造_______________。
（3）基因敲除技术中存在着一个难以克服的缺陷：敲除了某个基因后，可能不会产生容易识别的表型改变，因此就不能获知该基因的功能，请你分析原因：_________________________。
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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导入受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是 （ ）
A．基因敲除实际上是抑制某个基因的表达，从而达到使该基因“沉默”的目的
B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因
C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因
D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天性愚型
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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导入受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是（ ）
A．基因敲除实际上是抑制某个基因的表达，从而达到使该基因“沉默”的目的
B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因
C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因
D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天性愚型
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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理。将同源DNA片段导入受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是
A．基因敲除实际上是删除某个基因，从而达到使该基因“沉默”的目的
B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因
C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因
D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天性愚型
