如图为构建某重组质粒的过程示意图．lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质 X﹣gal，...

如图为构建某重组质粒的过程示意图．lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质 X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色．图中甲﹣﹣戊 DNA 片段只注 明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明．

（1）若酶 M 特异性识别的 DNA 碱基序列是，则酶 N 特异性识别的 DNA 碱基序列是______________________。

（2）过程②是将所有片段混合在一起，用___________酶拼接可得到不同的重组 DNA．

（3）如果只考虑 2 个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状 DNA 的片段组合 是_____。

A．甲和乙　 B．甲和甲　　 C．甲和丁　　 D．乙和乙　　 E．乙和丁　　　 F．丁和丁

（4）为了筛选含重组质粒的受体菌，应在培养基中额外加入______________培养 一段时间，挑选出___________色的菌落进一步培养．原来质粒中，限制酶 M 和 N 的酶切位点 应该位于___________。

A．M 位于青霉素抗性基因中，N 位于 lacZ 基因中

B．N 位于青霉素抗性基因中，M 位于 lacZ 基因中

C．M 和 N 都位于青霉素抗性基因中

D．M 和 N 都位于 lacZ 基因中

（5）上述目的基因能够在受体细菌中表达，其原因是不同生物______________________。

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如图为构建某重组质粒的过程示意图，lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色。图中甲-戊DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。

（1）若酶 M 特异性识别的DNA碱基序列是，则酶N特异性识别的DNA碱基序列是______________________。

（2）过程②是将所有片段混合在一起，用___________酶拼接可得到不同的重组DNA。

（3）如果只考虑2个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状DNA的片段组合是_____。

A．甲和乙　　　　　　 B．甲和甲　　　　 C．甲和丁　　 D．乙和乙　　　　　　 E．乙和丁　　　　 F．丁和丁

（4）为了筛选含重组质粒的受体菌，应在培养基中额外加入______________培养一段时间，挑选出___________色的菌落进一步培养。原来质粒中，限制酶M和N的酶切位点应该位于___________。

A．M位于青霉素抗性基因中，N位于lacZ基因中

B．N位于青霉素抗性基因中，M位于lacZ基因中

C．M和N都位于青霉素抗性基因中

D．M和N都位于lacZ基因中

（5）以此题为例，简述如何正确判断酶切位点的位置：_______________________。

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下图为“乙肝基因工程疫苗”的生产和使用过程，选用带有 lacZ 基因的质粒，则质粒导入细菌后，细菌可利用加入培养基的物质 X-gal，菌落显现出蓝色；若无该基因，菌落则成白色。

（1）乙肝病毒结构中的___________________是激发免疫反应的抗原。

（2）过程①选用的限制酶方案可以是____________。

A．EcoRV 和 BamHI　　　 B．BamHI 和 EcoRI　　 C．EcoRV 和 EcoRI　　 D．只用 BamHI

（3）为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中还应额外加入___________和___________，培养一段时间挑选出___________（蓝色/白色）的菌落进一步培养获得大量目的菌 B 大肠杆菌。

（4）从分子水平写出A大肠杆菌与B大肠杆菌的三点不同：___________________

（5）科学家们首先选择了大肠杆菌作为受体细胞，这是因为微生物具有___________________的优点。（写出 2 点）

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生物技术及生命科学应用

下图为“乙肝基因工程疫苗”的生产和使用过程，选用带有 lacZ 基因的质粒，则质粒导入细菌后，细菌可利用加入培养基的物质 X-gal，菌落显现出蓝色；若无该基因，菌落则成白色。

（1）乙肝病毒结构中的___________________是激发免疫反应的抗原。

（2）过程①表示基因工程中的____________________（步骤）， 过程① 选用的限制酶方案可以是____________（多选）。

A．EcoRV 和 BamHI　　　　　　　　　　　　 B．BamHI 和 EcoRI　　

C．EcoRV 和 EcoRI　　　　　　　　　　　　　 D．只用 BamHI

（3）获取目的基因的方法除了图中用酶切的方法从细胞中分离以外，还可以通过___________________________来获得。

（4）为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中还应额外加入___________和___________，培养一段时间挑选出___________（蓝色/白色）的菌落进一步培养获得大量目的菌 B 大肠杆菌。

（5）从分子水平写出A 大肠杆菌与 B 大肠杆菌的三点不同：_________________________

（6）科学家们首先选择了大肠杆菌作为受体细胞，这是因为微生物具有___________________________________________________________的优点。（写出 2 点）

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大肠杆菌PUC19质粒如下图所示。LacZ基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解x-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRI构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因）并进行检测。下列叙述错误的是

A. 检测前用稀释涂布平板法接种受体菌

B. 培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal

C. 挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌

D. 应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养

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大肠杆菌PUC19质粒如下图所示。LacZ基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解x-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRI构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因）并进行检测。下列叙述错误的是

A. 检测前用稀释涂布平板法接种受体菌

B. 培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal

C. 挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌

D. 应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养

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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ’基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图。下列说法错误的是（　　 ）

A．基因工程中，构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用

B．转化过程中，大肠杆菌应先用Ca2+处理，使其能够吸收周围DNA的状态

C．菌落颜色为白色的是菌落②

D．菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是抗原—抗体杂交

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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β－半乳糖苷酶在X－gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图所示。请据图回答：

(1)基因工程中，能使目的基因在受体细胞中特异性表达的调控序列是_______ 。

(2)限制酶EcoR Ⅰ的识别序列和切割位点是－G↓AATTC－，Sma Ⅰ的识别序列和切割位点是－CCC↓GGG－。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是__________，连接过程中需要的基本工具是__________。

(3)转化过程中，大肠杆菌应先用________处理，使其处于能吸收周围DNA的状态。

(4)菌落颜色为白色的是________，原因是_______________________。

(5)菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_________________。

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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β－半乳糖苷酶在X－gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图所示。请据图回答：

(1)基因工程中，能使目的基因在受体细胞中特异性表达的调控序列是_______ 。

(2)限制酶EcoR Ⅰ的识别序列和切割位点是－G↓AATTC－，Sma Ⅰ的识别序列和切割位点是－CCC↓GGG－。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是__________，连接过程中需要的基本工具是__________。

(3)转化过程中，大肠杆菌应先用________处理，使其处于能吸收周围DNA的状态。

(4)菌落颜色为白色的是________，原因是_______________________。

(5)菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_________________。

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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图。请据图回答：

（1）基因工程中，构建基因表达载体的目的是_____________________________________________。

（2）限制酶EcoRⅠ的识别序列和切点是—G↓AATTC—，SmaⅠ的识别序列和切点是—CCC↓GGG—。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是__________，连接过程中需要的基本工具是________。

（3）转化过程中，大肠杆菌应先用_______处理，使其处于能吸收周围DNA的状态。

（4）菌落的颜色为白色的是______，原因是_____________________________。

（5）菌落③中的目的基因是否能表达，可采用的检测办法是_____________________。

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