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嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答:

(1)图中的结构A是_______,其主要作用是_____________________。一个完整的基因表达载体组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有_____________________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用________________两种限制酶进行切割,影响限制酶处理效果的因素可能有___________(多选)。

①反应温度   ②缓冲液pH   ③限制酶的浓度   ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现,重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加___________,整个实验过程应保持_________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是_________。

A.引物Ⅰ:…GGGAATTC…;引物Ⅱ:…CTCATATG…

B.引物Ⅰ:…GAATTCCC…;引物Ⅱ:…CATATGAG…

C.引物Ⅰ:…GGAAGCTT…;引物Ⅱ:…AAGCTTCC…

D.引物Ⅰ:…CTCATATG…;引物Ⅱ:…AAGCTTAAGCTT…

高三生物非选择题困难题

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