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黑胸大蠊是一种生活在我国南方地区的主要卫生害虫,通过生物防治手段可以起到一定抑制虫害的作用。某研究小组对黑胸大蠊浓核病毒的PfDNV基因与pUCl19质粒进行重组构建,通过感染黑胸大蠊研究其病理特征,已知KpnⅠ、PstⅠ、HindⅢ3种限制酶的酶切位点不同,Amp为氨苄青霉素抗性基因,实验过程图解如下。请分析回答下列问题:

(1)纯化后的PfDNV基因可通过___________技术扩增。常将PfDNV基因与pUC119 质粒采取加G—C尾的连接方式构建重组质粒,该加尾的连接方式能使重组质粒的热稳定性___________。

(2)研究小组将获得的重组质粒通过___________法转染大肠杆菌,在含有___________的培养基上培养一段时间后,挑选出部分菌株,用HindⅢ酶解菌株中的重组质粒,经电泳分析后发现有些菌株显示有5kb和3.7kb片段,还有些菌株显示有1.8kb和6.9kb片段,出现这种情况的原因是______________________。

(3)选择可以正常表达的重组质粒PfDNV-pUCl19,利用KpnⅠ酶酶解后回收7.3kb的片段,通过_______的作用获得PfΔKpn-pUC119重组质粒,将两种重组质粒通过腹部注射法注入黑胸大蠊幼虫体内,所得的结果如下表所示。

质粒转染黑胸大蠊实验结果

接种物

接种虫数

感染虫数

感染百分数(%)

PfΔKpn-pUC119

(2500ng)

20

20

100

(1250ng)

20

1S

90

(250ng)

20

17

85

PfAKpn-pUC119

(2300ng)

20

0

0

(1000ng)

20

0

0

野生型病毒

20

20

100

未接种

20

0

0

从上表中可以看出,当注射的重组质粒PfDNV-pUCl19的量在___________ng及以上时,虫体最终死亡率与野生型病毒感染的结果—致。PfΔKpn-pUC119重组质粒注射幼虫后没有感染的根本原因是:KpnⅠ酶酶解后再连接,导致______________________。

高三生物非选择题困难题

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