科学家们发现长年生活在寒带的比目鱼不怕冻，因为比目鱼的身体里有一种抗冻蛋白质（AFP）。科学家将比目鱼的抗冻蛋白质基因转移到西红柿里，培育出了抗冻西红柿，这种西红柿可以在冬季或较寒冷的地区种植，使得人们一年到头都能吃到西红柿。下图为抗冻番茄的培育过程。据图回答：
（1）①过程为___________________，重组质粒除了含有目的基因外，还必须有_________________________________________________________________、复制原点。
（2）②过程常采用农杆菌转化法将AFP基因导入番茄细胞，除此之外，还可利用______________法（答出一种即可），③过程应用的主要技术是____________________________。
（3）若AFP基因已表达出抗冻蛋白，还需要进行个体水平的检测，如通过______________，以确定抗冻番茄植株是否具有抗寒特性。
高三生物非选择题中等难度题
科学家们发现长年生活在寒带的比目鱼不怕冻，因为比目鱼的身体里有一种抗冻蛋白质（AFP）。科学家将比目鱼的抗冻蛋白质基因转移到西红柿里，培育出了抗冻西红柿，这种西红柿可以在冬季或较寒冷的地区种植，使得人们一年到头都能吃到西红柿。下图为抗冻番茄的培育过程。据图回答：
（1）①过程为___________________，重组质粒除了含有目的基因外，还必须有_________________________________________________________________、复制原点。
（2）②过程常采用农杆菌转化法将AFP基因导入番茄细胞，除此之外，还可利用______________法（答出一种即可），③过程应用的主要技术是____________________________。
（3）若AFP基因已表达出抗冻蛋白，还需要进行个体水平的检测，如通过______________，以确定抗冻番茄植株是否具有抗寒特性。
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科学家发现胡萝卜中存在冷诱导的抗冻蛋白，克隆其cDNA，通过基因工程可用来改良植物的抗寒性。研究发现植物内源抗冻基因AFP基因更适宜在植物体内表达，比昆虫、海洋动物等的抗冻基因有更多的优点。下图为利用胡萝卜的AFP基因培育抗寒性强的番茄植株的过程。请据图回答下列问题：
（1）以幼小胡萝卜植株细胞中的mRNA为材料获得抗冻蛋白cDNA，要依据__________原则。利用PCR技术扩增AFP基因时，需要加入两种引物，原因是____________________酶只能从引物的3′端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增，该酶只能特异地复制处于__________之间的DNA序列，一个DNA分子经三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有__________个。
（2）将AFP基因导入植物细胞时，目前常用的目的基因载体是Ti质粒，AFP基因必须插入该基因载体的__________上。将重组AFP基因的表达载体导入农杆菌，再感染番茄细胞，可经过__________技术形成转基因植株。
（3）若要在个体水平上检测抗寒性强的番茄植株是否培育成功，请写出检测思路。_________________。
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基因工程的应用十分广泛，利用此项技术可创造出更加符合人类需求的优良品种或产品。如美洲拟鲽（是鲽科下的一种比目鱼）的体液中存在抗冻蛋白，能够降低鱼的血液冰点。科学家按cDNA路线分离和克隆了抗冻蛋白基因，并将其导入番茄，获得了抗冻的番茄品种。根据有关知识，回答下列问题：
（1）基因工程操作的核心步骤为____________，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是______________________________。
（2）将目的基因导入植物细胞最常用的方法是_____________。
（3）构建重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？________理由是_________________________________________________。
（4）质粒作为基因工程常用运载体必需具备的条件是________________（至少答2点）。
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北极比目鱼中有抗冻基因，其编号的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越多，越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是
A过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目录基因组测序
B多个抗冻基因编码去依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，
C过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有 11 个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正 确的是( )
A. 过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B. 将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，就能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C. 过程②构成的重组质粒应具有标记基因，并需要转入农杆菌进行筛选
D. 应用 DNA 探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有 11 个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正 确的是( )
A. 过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B. 将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，就能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C. 过程②构成的重组质粒应具有标记基因，并需要转入农杆菌进行筛选
D. 应用 DNA 探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是
A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B．将多个抗冻基因依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C．过程②构成重组质粒的过程中需要用到限制性核酸内切酶和DNA聚合酶
D．利用重组质粒的抗性基因可以筛选出目的基因完全表达的细胞
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北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是( )
A. 过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B. 将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C. 过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D. 应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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北极比目鱼中有抗冻基因,其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列,该序列重复次数越多,抗冻能力越强,下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图,有关叙述正确的是( )
A.过程①获取的目的基因,可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B.将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因,不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C.过程②构成的重组质粒缺乏标记基因,需要转入农杆菌才能进行筛选
D.应用DNA探针技术,可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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北极比目鱼中有抗冻基因,其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（ ） 
A过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
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