基因编辑技术能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定 DNA 片段的敲除、加入等。将经...

基因编辑技术能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定 DNA 片段的敲除、加入等。将经基因编辑后的体细胞输回患者体内，成功“治愈”了白化病女孩 Layla， 以下叙述正确的是（）

A. 白化病与艾滋病的预防都需要进行遗传咨询

B. 对特定DNA 片段的敲除与加入属于基因突变

C. Layla 体内的编辑基因会通过卵子遗传给她的孩子

D. Layla 与正常男性婚配所生男孩全部患病，女孩一半患病

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先导编辑技术是利用经过改造的Cas9蛋白，在基因组中的特定位点切断DNA，随后逆转录酶在RNA链的引导下在切断处进行基因编辑，其能实现更精准地对DNA进行编辑，该过程流程如图所示。该技术可以实现基因的定点突变和整合，将修饰好的基因导入胚胎干细胞，治疗人类某些单基因遗传病。

（1）基因重组技术工具中的_______酶与先导编辑工具中Cas9蛋白作用相似，但二者的不同之处是前者____________________________________________________________。

（2）下图为由经过修饰的pku基因构建的重组载体，在转化胚胎干细胞时，只有重组载体中整合区域正确整合到胚胎干细胞染色体DNA上才表示转化成功，而重组载体的其他区域将被靶向分解。在转化中会出现错误整合，整合错误才会出现重组载体中的两个HSV-tk中至少会有一个与neor一起整合到染色体DNA上而不被分解。已知含有标记基因neor的细胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。

①题干中的胚胎干细胞可以来自_____________________________，利用胚胎干细胞为受体细胞是因为其功能上具有________________________。

②胚胎干细胞在体外培养时需要满足的条件除一定的气体环境、充足营养、适宜的温度和PH外，还应保证____________条件，气体环境中的CO2的作用是_____________________。

③转化后的各类胚胎干细胞要依次在含有G418和____________________的培养液中培养，在双重选择下存活并增值的是正确整合的胚胎干细胞，原因是________________________________________。

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CRISPR/Cas9基因编辑技术是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行准确切割的技术，通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进步切割（如图）。下列相关叙述的正确是（　　 ）

A. Cas9蛋白通过破坏氢键实现对特定基因的准确切割

B. 向导RNA中的双链区遵循碱基配对方式为A﹣T，C﹣G

C. 向导RNA可在逆转录酶催化下合成

D. 若α链剪切点附近序列为…TCCAGAATC…则相应的识别序列为…UCCAGAAUC…

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CRISPR/Cas9基因编辑技术是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行准确切割的技术，通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进步切割（如图）。下列相关叙述的正确是（　　 ）

A. Cas9蛋白通过破坏氢键实现对特定基因的准确切割

B. 向导RNA中的双链区遵循碱基配对方式为A﹣T，C﹣G

C. 向导RNA可在逆转录酶催化下合成

D. 若α链剪切点附近序列为…TCCAGAATC…则相应的识别序列为…UCCAGAAUC…

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CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA 上的目标位点进行切割（见下图）。下列相关叙述错误的是

A. 向导RNA可通过转录形成

B. 向导RNA中的双链区遵循碱基互补配对原则

C. Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成

D. Cas9蛋白通过破坏目标DNA的氢键实现对DNA的切割

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CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA 上的目标位点进行切割（见下图）。下列相关叙述错误的是

A.向导RNA可通过转录形成

B.向导RNA中的双链区遵循碱基互补配对原则

C.Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成

D.Cas9蛋白通过破坏目标DNA的氢键实现对DNA的切割

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CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA 上的目标位点进行切割（见下图）。下列相关叙述错误的是

A. 向导RNA可通过转录形成

B. 向导RNA中的双链区遵循碱基互补配对原则

C. Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成

D. Cas9蛋白通过破坏目标DNA的氢键实现对DNA的切割

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为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片段大小。下表是某小组进行的相关实验。

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为　　 　 个和　 　　 个。

（3）根据表中数据，请在下图中用箭头标出相应限制酶的酶切位点。

（4）已知BamH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHI和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干次循环后和　　　 　　　　 序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化　　　　　　　　 键的形成。

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为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

（1）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。

（2）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。 _________________

（3）BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后_______序列明显增多。

（4）用于基因治疗的基因种类有：______________、_____________、_____________。

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（12分）为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

（1）该实验设计主要体现了__________________原则。

（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。

（3）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。

（4）已知BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamH Ⅰ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后“AGATCC//TCTAGG”和___________序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。

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