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乳糖酶是一种生物酶制剂，主要用来治疗乳糖不耐受症。研究人员利用基因工程技术，将人工优化的米曲霉乳糖酶基因（lacA）导入乳酸克鲁维酵母细胞，获得了高效表达乳糖酶的重组菌株。下图1为载体PKLACl的限制酶切图谱（总长度为9091bp，bp表示碱基对；XhoⅠ、BglⅡ、SacⅡ表示限制酶，数字代表碱基的编号），amdS基因编码的乙酰胺酶能够将乙酰胺降解成氨，只有转化成功的乳酸克鲁维酵母才能在乙酰胺作为唯一氮源的培养基中生长。图2为含有lacA的DNA片段。
请回答下列问题：
（1）米曲霉合成并分泌至胞外的乳糖酶能将乳糖分解为________。
（2）优化后的米曲霉乳糖酶基因片段lacA中G-C碱基含量由原来的51.4%降低到39.2%，使乳酸克鲁维酵母偏爱的密码子出现的频率大幅度增加，从而在不改变乳糖酶________序列的前提下，提高了重组菌株该基因表达中________（填具体步骤）的效率。
（3）将优化的米曲霉乳糖酶基因片段lacA与pKLACl分别使用用XhoⅠ、BelⅡ双酶切，然后用________连接,得到含目的基因的重组质粒（pKLAC1—lacA，长度为12040bp）。若目的基因置换了pKLACl中一段长33bp的片段，则目的基因的长度为________bp.
（4）用小剂量质粒提取试剂盒提取重组质粒，对所提取的重组质粒用SacⅡ单酶切后纯化，纯化产物用1%琼脂凝胶进行电泳检测。若结果如图3中的第________（填序号）泳道所示，则说明优化后的目的基因片段lacA成功构建在质粒pKLACl中。
（5）将重组质粒pKLACl-lacA用SacⅡ单酶切使其线性化，纯化后与感受态乳酸克鲁维酵母细胞混合、转化。用________适当稀释细胞液，均匀地涂布于________平板上进行培养，富集并筛选重组菌株。将筛选出的重组菌株进行发酵培养120h，检测________，最终获得高效表达乳糖酶的重组菌株。
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果胶酶是应用于果酒生产的重要酶制剂之一，它广泛存在于细菌、酵母菌等多种微生物细胞中。某枯草杆菌含果胶酯酶基因，某酿酒酵母中含有多聚半乳糖醛酸酶基因。研究者利用基因工程技术实现了果胶酯酶基因在酿酒酵母中表达，克服了细菌作为外源基因表达系统的缺点，并且使多种有利特性集中在同一菌株，过程如图。回答下列问题。
（1）细菌因繁殖快、细胞内存在易于分离的质粒等优点，最早用于外源蛋白的生产“工厂”，其缺点是没有___________（填细胞器名称），因而不具有对蛋白质加工修饰的功能。
（2）①过程获得的目的基因是___________。该基因除了利用PCR技术进行扩增外，还可以从基因文库中获取。基因文库包括基因组文库和cDNA文库，其中_____________含有某种生物的全部基因，且具有内含子。
（3）②过程重组表达载体除了含有目的基因外，还必须有启动子、_____________和 _____________等。启动子是_____________识别和结合的部位，有了它才能驱动DNA转录出mRNA，最终获得目的蛋白质。
（4）现利用目的基因制成放射性探针，如何利用此探针检测目的基因是否成功导入酿酒酵母?____________________________________________。
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(五）回答有关现代生物技术应用的问题。
乳糖不耐受是由于乳糖酶（LCT)分泌少，不能完全消化分解母乳或牛乳中的乳糖所引起的非感染性腹泻。我国利用生物技术培育出转基因低乳糖奶牛新品种，给患乳糖不耐症患者带来福音。上图为转基因低乳糖奶牛培育流程。下图是使用限制酶BamHⅠ切开DNA产生的结果。
1.图中的牛胎儿成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导才能实现 。
A. 细胞全能性 B. 细胞核全能性
C. 细胞质全能性 D. 细胞融合
2.据图分析，BamHⅠ的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是________。
3.图中质粒S用BamHⅠ和HindⅢ联合酶切后形成1.8kb和8.2kb(1kb=1000对碱基)两种片段，若用BamHⅠ和EcoRⅠ联合酶切重组质粒T，获得1.6kb和8.8kb两种片段，则转入的LCT基因长度为____kb。
4.分析图，成功导入质粒T的牛胎儿成纤维细胞与转基因低乳糖奶牛的乳腺细胞中的化合物，在表中用“√”表示存在，用“×”表示不存在。
| 化合物 | 牛胎儿成纤维细胞 | 转基因低乳糖奶牛乳腺细胞 |
| LCT基因 | | |
| LCTmRNA | | |
| LCT | | |
5.培育转基因奶牛涉及的生物技术有_____________________(写出两种）。
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科学家研究大肠杆菌乳糖代谢的过程，明确了原核生物基因表达调控的机制。大肠杆菌中直接编码乳糖代谢所需酶类的基因叫结构基因，包括基因lacZ、基因lacY和基因lacA，结构基因的上游有3个对结构基因调控作用的基因，下图是科学家提出的一种基因表达调控假设，请据图回答问题：
（1）阻抑物是调节基因通过__________过程合成的。
（2）lacZ、Y、A基因的转录是由调节基因R合成的阻抑物所控制。其诱导物可以是乳糖或IPTG（二者作用机理相同）。没有乳糖时，阻抑物总是与操纵基因O结合，导致邻近的结构基因不能转录；乳糖存在时，结构基因进行转录，原因是______________________________。当IPTG做为诱导物时，lacZ、Y、A三个基因的产物表达量__________（相同/不同）。
（3）伪狂犬病病毒是双链DNA病毒，TK基因是与毒力相关的主要基因之一，它与病毒的复制，潜伏感染有关，有研究表明TK基因的缺失可使病毒的毒力显著降低，同时潜伏感染能力也下降，研究者将lacZ基因插入TK基因中，构建了伪狂犬病病毒突变株。研究者通过检测被突变株侵染的细胞中__________将底物催化产生半乳糖，筛选出突变株，该突变株的毒力__________。
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科学家通过对大肠杆菌乳糖代谢的研究，弄清了原核生物基因表达调控的机制。大肠杆菌中直接编码乳糖分都代谢所需酶类的基因叫结构基因，包括基因lacZ、基因lacY，基因lacA，结构基因的上游有3个对结构基因起调控作用的核苷酸序列，其中操纵基因对结构基因起着“开关”的作用，直接控制结构基因的转录，调节基因能够调节操纵基因状态，从而对“开关”起着控制作用，下图1是科学家提出的一种基因表达调控假设。回答下列问题：
（1）细胞中RNA聚合酶的化学本质是________，它在基因中的结合位点是________。
（2）图1中①过程发生的场所是________，完成②过程中遗传信息的准确传递，主要依据
________，完成①②过程需要的能量直接来自ATP，ATP中的“A”与调节基因和mRNA中的“A”________（填“是”或“不是”）同一物质。
（3）研究发现，当大肠杆菌培养基中的葡萄糖而没有乳糖存在时，大肠杆菌不能合成乳糖代谢所需酶，试依据图1解释其原因________。上述调节机制既保证了大肠杆菌能量的供应，又可以________。
（4）当培养基中没有葡萄糖仅有乳糖时，大肠杆菌必须合成乳糖代谢酶，上图2表示了这一诱导过程，据图可知，当乳糖进入大肠杆菌细胞后，乳糖与阻遏蛋白结合，引起阻遏蛋白分子空间结构改变，阻遏蛋白失去与________结合的能力，保证RNA聚合酶正常发挥功能。
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转基因技术的应用使生物界产生了许多新的生物类型，完成了多种生物性状的定向改变，如利用转基因技术培育高血压大鼠，研究其致病机理及治疗药物的选择；将铁结合蛋白质导入高产水稻中，获得高产、含铁量高的水稻株系等。请回答下列问题：
（1）转基因生物的培育的首要条件是先获得目的基因，常用 技术在体外大量扩增；构建基因表达载体时需要的工具酶有 ，基因表达载体中标记基因的作用是 。
（2）在转基因动物的培育过程中，将目的基因导入受精卵采用最多的方法是 ，体外培养受精卵时，培养液中提供CO2的目的是 。若将得到的胚胎进行分割，其操作过程中特别需要注意的问题是 。
（3）植物组织培养中，培养基中的 和 的比例影响细胞发育的方向。
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科研人员利用生物工程技术对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，技术流程如图，分析回答
⑴步骤①的技术名称_________。
⑵将基因导入ES细胞而不是上皮细胞是因为____________。
⑶步骤③中，需要构建含有___________________的基因表达载体。之前利用PCR技术扩增目的基因，可以从图2的ABCD四种单链DNA片断中选取_______作为引物。对干扰素基因片断和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为________________或_________。
⑷将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_________________________的方法。
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科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成并分泌人的生长激素，在医学研究及相关疾病的治疗方面都具有重要意义。下列有关叙述错误的是( )
A. 选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为该细胞全能性较高
B. 采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C. 人的生长激素基因能在小鼠细胞中成功表达，说明遗传密码具有通用性
D. 与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器不受性别等限制，受体来源更广泛
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科学家利用生物技术将人生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。下列有关叙述错误的是
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为，占全能性高
B．获得的转基因鼠通过自由交配后可以获得纯种转基因鼠
C．该项技术不会引起伦理、道德、安全性等方面的问题
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代
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科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。下列有关叙述错误的是
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞具有发育的全能性
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞正常表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代