乙型脑炎病毒（JEV）是一种 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用...

乙型脑炎病毒（JEV）是一种 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用基因重组的方法构建了二种新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。图示主要流程。

1.过程①为_____；过程②所需要的酶是_____。

2.研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的 E 蛋白结构不完全相同。原因是 　　 。

A.大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录

B.大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工

C.两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同

D.两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同

3.关于 DNA 疫苗的叙述，正确的是　　

A.分子较小，结构较稳定 B.能通过 PCR 技术增加生产量

C.能激活机体产生特异性免疫 D.DNA 疫苗已广泛用于人工免疫

如图表示N 质粒和成功导入 E 蛋白基因的质粒 EN。为筛选含 EN 的菌落，可用含不同抗生素： 氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到 A、B、C 三类菌落，生长情况如表 。（‘+’代表生长，‘-’代表不生长）

4.表 中无抗生素平板培养基的作用是_____。另三种培养基属于下列选项中的_____。

A．固体培养基　　　 通用培养基　　　　　　 B．固体培养基　　　 选择培养基

C．液体培养基 通用培养基　　　　　　 D．液体培养基 选择培养基

5.据图 和表判断， 　　 。

A.A 菌落细胞被导入了N 质粒 B.B 菌落细胞被导入 EN 质粒

C.C 菌落细胞未被导入任何质粒 D.两种抗生素均能抑制 E 蛋白表达

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阅读以下材料回答下列小题

乙型脑炎病毒（JEV）是一种RNA病毒，病毒的E蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用 基因重组的方法构建了二种新型JEV疫苗：DNA疫苗和E蛋白疫苗。图示主要流程。

1.研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的E蛋白结构不完全相同，最可能的原因是：（　　 ）

A.两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同

B.大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录

C.大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工

D.两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同

2.①代表什么过程，②所需要的酶是 （　　 ）

A.转录　　 DNA聚合酶与DNA连接酶

B.逆转录　　 逆转录酶与RNA聚合酶

C.翻译　　 DNA聚合酶与RNA聚合酶

D.逆转录　　 限制酶与DNA连接酶

3.如图表示N质粒和成功导入E蛋白基因的质粒EN。为筛选含EN的菌落，可用含不同抗生素：氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到A、B、C三类菌落，生长情况如表。（“+”代表生长，“-”代表不生长）据图和表分析，不能得出的结论是（　　 ）

A.A菌落细胞被导入了N质粒 B.两种抗生素均能抑制E蛋白表达

C.C菌落细胞未被导入任何质粒 D.B菌落细胞被导入EN质粒

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阅读以下材料回答下列小题

乙型脑炎病毒（JEV）是一种RNA病毒，病毒的E蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用 基因重组的方法构建了二种新型JEV疫苗：DNA疫苗和E蛋白疫苗。图示主要流程。

1.研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的E蛋白结构不完全相同，最可能的原因是：（　　 ）

A.两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同

B.大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录

C.大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工

D.两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同

2.①代表什么过程，②所需要的酶是 （　　 ）

A.转录　　 DNA聚合酶与DNA连接酶

B.逆转录　　 逆转录酶与RNA聚合酶

C.翻译　　 DNA聚合酶与RNA聚合酶

D.逆转录　　 限制酶与DNA连接酶

3.如图表示N质粒和成功导入E蛋白基因的质粒EN。为筛选含EN的菌落，可用含不同抗生素：氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到A、B、C三类菌落，生长情况如表。（“+”代表生长，“-”代表不生长）据图和表分析，不能得出的结论是（　　 ）

A.A菌落细胞被导入了N质粒 B.两种抗生素均能抑制E蛋白表达

C.C菌落细胞未被导入任何质粒 D.B菌落细胞被导入EN质粒

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乙型脑炎是由乙型脑炎病毒（JEV）引起的神经系统疾病。乙型脑炎病毒是一种RNA病毒，E蛋白参与病毒复制过程。市售灭活疫苗缺乏长效免疫，必须多次加强接种。研究人员利用基因重组的方法构建了三种新型JEV疫苗：E蛋白疫苗（A 疫苗）、重组病毒疫苗（B疫苗）和DNA疫苗（C疫苗），实验主要流程如下图所示。请回答下列问题：

（1）请填写图中①②的名称：①__________；②__________。

（2）利用小鼠模型评价以上三种疫苗的保护效果。将成年和幼年小鼠分组，每组10 只，分别注射不同的疫苗或试剂，检测小鼠体内效应T细胞的杀伤活性和对病毒攻击的免疫保护，结果如下表。

三种疫苗注射到小鼠体内后，均能检测到乙型脑炎病毒的E蛋白，E蛋白作为________________激发小鼠的

__________免疫。为检验三种疫苗的免疫效果是否达标，还应给小鼠注射__________作为对照。

（3）进一步测量小鼠的血清抗体水平，部分结果如下图所示，第一次免疫后三种疫苗诱发的抗体水平无明显差异，但第2次免疫后，__________。研究者还发现，注射C疫苗后，幼年小鼠产生抗体明显高于成年小鼠，推测原因可能是由于DNA 疫苗注射到肌肉后，幼鼠肌细胞代谢旺盛，摄取__________的能力较强。

（4）综上所述，三种疫苗都能诱发小鼠产生__________，实现抗乙型脑炎病毒的保护作用。科研人员对DNA疫苗的使用持谨慎态度，请简要评述DNA疫苗的利弊：____________________。

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（14分，每空2分）乳头瘤病毒（HPV）持续感染可导致宫颈癌发生。科研人员将HPV外壳L1蛋白基因与在人体中不能复制但能有效表达外源基因的痘苗病毒重组，制备新型疫苗。

（1）为研究重组疫苗的保护作用，将生长发育状况一致的小鼠随机均分为三组，1组注射　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，2组注射100μL PBS缓冲液配制的痘苗病毒作为对照，3组注射　　　　　　　　　　　　　　　　 作为空白对照。

（2）给上述三组小鼠皮下注射C3细胞（含有HPV基因的癌细胞），观察、记录小鼠成瘤情况，结果如下。

据实验结果分析，尽管各组小鼠都可成瘤，但实验组小鼠____________，说明重组病毒疫苗具有一定的免疫保护作用。接种重组病毒疫苗的小鼠体内表达____________作为抗原，刺激机体产生特异性免疫。皮下注射C3细胞时，HPV引起______________细胞迅速增殖、分化，产生大量抗体，从而起到免疫保护作用。根据免疫学知识，注射疫苗后，只有诱发出机体的_________免疫，才能有效清除癌细胞。

（3）若欲检验重组病毒疫苗是否有治疗作用，对小鼠进行的处理最恰当的是____（选填下列字母）。

a．先注射HPV病毒，一段时间后注射重组病毒疫苗

b．先注射重组病毒疫苗，一段时间后再注射HPV病毒

c．先注射C3细胞，一段时间后注射重组病毒疫苗

d．先注射重组病毒疫苗，一段时间后再注射C3细胞

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乳头瘤病毒(HPV)持续感染可导致宫颈癌发生。科研人员将HPV外壳L1蛋白基因与在人体中不能复制但能有效表达的痘苗病毒重组，制备新型疫苗。

(1)为研究重组疫苗的保护作用，将生长发育状况一致的小鼠随机均分为三组，1组注射用PBS缓冲液配制的重组病毒疫苗100 μL,2组注射100 μL PBS缓冲液配制的痘苗病毒作为对照，3组注射__________________作为空白对照。

(2)给上述三组小鼠皮下注射C3细胞(含有HPV基因的癌细胞)，观察、记录小鼠成瘤情况，结果如下。

据实验结果分析，尽管各组小鼠都可成瘤，但实验组小鼠________________________(两点)，说明重组病毒具有一定的免疫保护作用。接种重组病毒疫苗的小鼠体内表达L1蛋白作为__________，刺激机体产生特异性免疫。皮下注射C3细胞时，HPV引起____________细胞迅速增殖、分化，效应B细胞产生大量抗体，从而起到免疫保护作用。根据免疫学知识，注射疫苗后，只有诱发出机体的__________免疫，才能有效清除癌细胞。

(3)若欲检验重组病毒疫苗是否有治疗作用，对小鼠进行的处理恰当的是________(选填下列字母)。

a．先注射C3细胞，一段时间后注射重组病毒疫苗

b．先注射重组病毒疫苗，一段时间后再注射C3细胞

(4)若将小鼠B淋巴细胞注入家兔体内，产生免疫反应后，家兔血清能使小鼠T细胞凝集成细胞团，原因是________________________________________________。

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乙型肝炎病毒（HBV）可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系，图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白流程图。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增图1中HBx基因时，在第______次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键______（填“相同”或“不相同”）。

（2）基因表达载体导入受精卵常用______法，检测HBx基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与相应的物质杂交。

（3）④过程体外受精前需要对精子进行______处理，卵母细胞需要发育到______期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过______处理的受体仓鼠子宫内。

（4）在⑤步聚操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是______。

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乙型肝炎病毒（HBV）可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系，图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白流程图。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增图1中HBx基因时，在第______次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键______（填“相同”或“不相同”）。

（2）基因表达载体导入受精卵常用______法，检测HBx基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与相应的物质杂交。

（3）④过程体外受精前需要对精子进行______处理，卵母细胞需要发育到______期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过______处理的受体仓鼠子宫内。

（4）在⑤步聚操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是______。

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人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗生产和抗体制备的流程如下图：

（1）过程①代表的是　　　　 ，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，其应该能被受体细胞的　　　　　　　　 所识别，以便于其转录。

（2）在将X进行扩大培养之前，至少需要经过两次筛选，方法分别是用　　　　　　　　 和　　　　　　　　　 。

（3）以实验操作过程中用到的技术有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （至少写三个）。

（4）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的　　　　　　 来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的

　　　　　　　　　　 与分离出的病毒进行特异性检测。

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人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗生产和抗体制备的流程如下图：

（1）过程①代表的是　　　　 ，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，其应该能被受体细胞的　　　　　　　　 所识别，以便于其转录。

（2）在将X进行扩大培养之前，至少需要经过两次筛选，方法分别是用　　　　 　　 和　　　　 　　 。

（3）以实验操作过程中用到的技术有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （至少写三个）。

（4）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的　　　　　　 来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的　　　　　　　　　　 与分离出的病毒进行特异性检测。

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