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环境DNA(eDNA)技术是指从环境中提取DNA片段，结合PCR和DNA测序等分子生物学技术来定性或定量检测目标生物，从而确定其分布状况等，是一种新型生物资源调查手段。科研人员利用eDNA 技术对某段长江流域的江豚分布进行了调查。
（1）江豚是我国现存的唯一水生哺乳动物，国家一级濒危物种，不宜用传统的_____法进行种群数量调查。江豚在生态系统中属于_______。
（2）水样中提取的eDNA来源很丰富，可能来自水中动植物死亡后的组织细胞及各种排泄物，以及水中的________，甚至可能来自陆生动植物遗留在水中或由于人类活动进入到水体中的DNA。
（3）设置10 个检测点，采集水样并提取_____。检测点包括观测到江豚出现的水域，以及未观测到但适宜江豚生存的水域（疑似点）。
（4）eDNA分析
首先根据江豚线粒体的特有基因设计_________，然后进行荧光定量PCR。每一个循环包括_______、复性和延伸三步，需要的酶是___________。每个DNA样品重复测定3次。结果如下表所示：
检测点
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
观测到的江豚数量（头）
0
0
0
2
0
0
8
3
2
0
eDNA平均浓度（拷贝数/升）
-
14996
5194
2820
-
-
35588
3027
1105
-
注：“-”表示未检出。
测定结果显示，观测到江豚的4个水域结果都呈阳性，其他6个疑似点中_____的检测结果也呈阳性，说明这些疑似点也是江豚活动的水域。
（5）eDNA技术具有高灵敏、低成本、无损伤、快捷方便等优点，应用前景广泛，但不能用于__________。
A．物种多样性的研究 B．某种鱼类的食性分析
C．濒危物种的调查 D．准确判断物种的实时存在情况
（6）目前鱼类资源的减少被认为是造成长江江豚数量下降的主要原因之一。研究者用eDNA技术测定了该流域内浮游动物的生物量，可进一步根据营养级之间的____估算出鱼类资源量，进而评价该流域江豚的生存状况。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]下图为某种转基因抗病棉花培育过程图，请据图回答下列问题：
(1) PCR技术利用的基本原理是 ___。利用该技术扩增目标DNA片段（子链的延伸方向从5'→3'），应选择图巾的引物____（填字母）与模板DNA结合。
(2)在构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，获得不同的黏性末端，其主要目的是防止____和反向连接。
(3)将重组质粒导入植物细胞中常用的方法是____。我国科学家将重组质粒导入棉花受体细胞所用的方法是____。
(4)重组细胞经过G、H过程成功地培育出了转基因抗病毒马铃薯植株，此过程涉及植物组织培养技术，该技术广泛应用于___ 、植物体细胞杂交育种等育种过程。
(5)研究表明，转基因植物可以通过花粉将外源基因扩散到其他植物，从而对生态环境造成潜在的危害。因此，科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中，这样做的目的是防止目的基因 __________________ 。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]下图为某种转基因抗病棉花培育过程图，请据图回答下列问题：
(1) PCR技术利用的基本原理是 ___。利用该技术扩增目标DNA片段（子链的延伸方向从5'→3'），应选择图巾的引物____（填字母）与模板DNA结合。
(2)在构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，获得不同的黏性末端，其主要目的是防止____和反向连接。
(3)将重组质粒导入植物细胞中常用的方法是____。我国科学家将重组质粒导入棉花受体细胞所用的方法是____。
(4)重组细胞经过G、H过程成功地培育出了转基因抗病毒马铃薯植株，此过程涉及植物组织培养技术，该技术广泛应用于___ 、植物体细胞杂交育种等育种过程。
(5)研究表明，转基因植物可以通过花粉将外源基因扩散到其他植物，从而对生态环境造成潜在的危害。因此，科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中，这样做的目的是防止目的基因 __________________ 。
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“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入引物1和引物2若干，两种引物及其与模板链的结合位置如下图1所示。图1的一个DNA分子经3轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，其中第⑤种DNA分子有几个
A.2 B.4 C.6 D.8
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PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是（ ）
A. 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键
B. 复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原则完成
C. 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D. PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
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PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是 （ ）
A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
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PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是（ ）
A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
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PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是
（ ）
A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
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关于生物工程技术的说法正确的是
A．PCR技术扩增人胰岛素基因需要加入从人体内提取的DNA聚合酶
B．体内受精作用时保证一个精子只能和一个卵细胞受精的机制有透明带反应和卵黄膜封闭作用
C．检测转基因生物是否具有目的基因控制的性状，用目的基因制作成的探针来检测
D．体外受精前，需要进行精子获能过程和将卵细胞培养到减数第一次分裂中期
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基因工程的第一步是筛选获取目的基因，利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段。图示某DNA分子经切后，DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程。
（1）PCR与生物体内DNA复制过程不同，解旋时不需要_______________酶催化而是通过_______________实现的，因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是_______________的。
（2）如果在某基因组中定位了一个目的基因X，其碱基序列未知，但已知X临近区域的一段DNA序列，此时可利用图示方法进行目的基因的筛选和扩增。作用于图示多个酶切点的限制酶种类应_______________（相同/不同）。操作时根据图中的_______________设计引物，将含有目的基因的DNA片段克隆出来，为便于目的基因与载体结合，可在_______________添加特定的限制酶识别序列。
（3）实践中也常用RT-PCR技术扩增目的基因，这种技术是以RNA为模板。若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，应选择_______________细胞提取RNA。
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