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人体内的t-PA蛋白能高效降解血栓,是心梗和脑血栓的急救药。然而,为心梗患者注射大剂量的t-PA会诱发颅内出血,其原因在丁t-PA作用的特异性不高。研究证实,将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。

(1)依据所需t-PA蛋白的结构和功能,对天然的t-PA基因进行序列改造,可制造出性能优异的t-PA突变蛋白,该技术称为_______________。

(2)已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链序列为ACA,而丝氨酸的密码子为UCU,因此突变基因编码该氨基酸的模板链序列应设计为______________。

(3)若获得的t-PA突变基因如下图所示,那么质粒pCLY11需用_______________两种限制酶切开,才能与t-PA突变基因高效连接。

(4)将连接成功的基因表达载休导入大肠杆菌中,在含有___________的培养基上挑选颜色呈____________的菌落,初步筛选导入成功的细胞。

(5)检测t-PA突变基因是否导入大肠杆菌,可利用t-PA突变基因制备探针,进行_______________,检测是否有杂交链;也可依据t-PA突变基因两端的序列设计引物对大肠杆菌的DNA进行PCR扩增,若出现了_______________说明t-PA突变基因已经导入了受体细胞。

(6)在上述步骤成功的基础上,若没有能从大肠杆菌中提取到相应的t-PA突变蛋白,其可能的原因是________________。

高三生物综合题中等难度题

少年,再来一题如何?
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