人 t-PA 蛋白能高效溶解血纤维蛋白凝聚的血栓。用传统基因工程生产的t-PA给心梗患者大剂量注射却会诱发颅内出血，原因在于其与血纤维蛋白结合的特异性低，但若将其第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，就能显著降低出血副作用。据此，科学家对人t-PA 基因进行序列改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，制造出了高性能的t-PA 突变蛋白。
（1）人 t-PA 基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA。丝氨酸的密码子为UCU，突变基因中对应该氨基酸密码子的碱基序列应设计为______。
（2）上述获得突变目的基因的基本途径是 ___。
（3）如图所示 t-PA 突变基因、质粒，用__________限制酶切开该质粒较好。
（4）将相应的重组质粒导入大肠杆菌中，含 t-PA 突变基因的细胞应具有的性状是______。
（5）上述生物工程技术是以_______为基础的，首先通过________，再进行______，以满足医疗需求的。
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人 t-PA 蛋白能高效溶解血纤维蛋白凝聚的血栓。用传统基因工程生产的t-PA给心梗患者大剂量注射却会诱发颅内出血，原因在于其与血纤维蛋白结合的特异性低，但若将其第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，就能显著降低出血副作用。据此，科学家对人t-PA 基因进行序列改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，制造出了高性能的t-PA 突变蛋白。
（1）人 t-PA 基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA。丝氨酸的密码子为UCU，突变基因中对应该氨基酸密码子的碱基序列应设计为______。
（2）上述获得突变目的基因的基本途径是 ___。
（3）如图所示 t-PA 突变基因、质粒，用__________限制酶切开该质粒较好。
（4）将相应的重组质粒导入大肠杆菌中，含 t-PA 突变基因的细胞应具有的性状是______。
（5）上述生物工程技术是以_______为基础的，首先通过________，再进行______，以满足医疗需求的。
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人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与血纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白。
（1）已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的编码序列（即模板链的互补链序列）为TGT，而丝氨酸的密码子为UCU，因此突变基因编码该氨基酸的编码序列应设计为_________。
（2）若获得的t-PA突变基因如图1所示，那么质粒pCLY11需用限制酶_________和_______切开，才能与t-PA突变基因高效连接。
（3）将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中，含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞应具有的性状是_______________。
A. 新霉素抗性且呈蓝色 B. 新霉素敏感且呈蓝色
C. 新霉素抗性且呈白色 D. 新霉素敏感且呈白色
（4）层析是蛋白质或酶分离提纯的重要步骤。在图2所示的层析装置中，层析柱内装填了特定的细小固体颗粒（称为层析介质），待分离的蛋白质或酶混合溶液流进流出层析柱，便可将目标蛋白与杂蛋白高效分离。试根据题干信息判断，为了高效分离t-PA 突变蛋白，层析介质表面事先应交联或固定___________________。制造该性能优异t-PA突变蛋白的过程称为___________工程。
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人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）
回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到 ___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。
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人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。
（1）为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白，该工程技术称为__________。
（2）若获得的t-PA突变基因如图所示，那么质粒pCLY11需用限制酶__________和__________切开，才能与t-PA突变基因高效连接。
（3）将连接好的DNA分子导入大肠杄菌中，对大肠杆菌接种培养。在培养基中除了加入水、碳源、氮源等营养物质外，还应加入__________进行选择培养，以筛选成功导入pCLY11的细菌。配置好的培养基通常采用__________法进行灭菌。
（4）对培养得到的菌落进行筛选，其中菌落为__________色的即为含t-PA突变基因重组DNA分子的大肠杆菌。得到的大肠杆菌能否分泌t-PA突变蛋白，可通过该细胞产物能否与__________特异性结合进行判定。
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人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。
（1）为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白，该工程技术称为__________。
（2）若获得的t-PA突变基因如图所示，那么质粒pCLY11需用限制酶__________和__________切开，才能与t-PA突变基因高效连接。
（3）将连接好的DNA分子导入大肠杄菌中，对大肠杆菌接种培养。在培养基中除了加入水、碳源、氮源等营养物质外，还应加入__________进行选择培养，以筛选成功导入pCLY11的细菌。配置好的培养基通常采用__________法进行灭菌。
（4）对培养得到的菌落进行筛选，其中菌落为__________色的即为含t-PA突变基因重组DNA分子的大肠杆菌。得到的大肠杆菌能否分泌t-PA突变蛋白，可通过该细胞产物能否与__________特异性结合进行判定。
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人体内的t-PA蛋白能高效降解血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的t-PA会诱发颅内出血，其原因在丁t-PA作用的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。
(1)依据所需t-PA蛋白的结构和功能，对天然的t-PA基因进行序列改造，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白，该技术称为_______________。
(2)已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此突变基因编码该氨基酸的模板链序列应设计为______________。
(3)若获得的t-PA突变基因如下图所示，那么质粒pCLY11需用_______________两种限制酶切开，才能与t-PA突变基因高效连接。
(4)将连接成功的基因表达载休导入大肠杆菌中，在含有___________的培养基上挑选颜色呈____________的菌落，初步筛选导入成功的细胞。
(5)检测t-PA突变基因是否导入大肠杆菌，可利用t-PA突变基因制备探针，进行_______________，检测是否有杂交链；也可依据t-PA突变基因两端的序列设计引物对大肠杆菌的DNA进行PCR扩增，若出现了_______________说明t-PA突变基因已经导入了受体细胞。
(6)在上述步骤成功的基础上，若没有能从大肠杆菌中提取到相应的t-PA突变蛋白，其可能的原因是________________。
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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)凝乳酶基因可从构建的凝乳酶基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从前者获取的凝乳酶基因__________（填“含有”或“不含有”）启动子。
(3)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。
(4)构建基因表达载体过程中需要用__________（酶）处理。目的基因转录过程中，__________能使转录在所需要的地方停止下来。
(5)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(6)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_______。
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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。构建的基因表达载体中通常含有标记基因，其作用是__________________。
(3)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(4)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_____________________________________。
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al一抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常采用注射入al—抗胰蛋白酶来缓解症状。图1表示获取al—抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：
(1)a过程是在__________酶的作用下完成的，该酶能够识别____________的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(2)怎样从基因文库中得到所需的目的基因呢？简单地说就是根据___________,如基因在染色体上的位置、基因的功能等特性来获取。
(3)为了获得更多的目的基因，可用PCR技术扩增目的基因。PCR技术是一项在__________复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(4)图2为矿区废弃地的生态恢复工程流程图，图2中的CD②分别为_________、___________,建立该生态统所要遵循的主要原理有___________________(写出1个即可)。
(5)图2中种植了抗逆性的植物，对于转基因生物人们存在安全方面的顾虑,按照对人类其中安全等动植物微生物和生态环境的危害程度，将农业转基因生物分为四个等级，其中安全等级级Ⅰ是指_______________(填“尚不存在”“具有低度”“具有高度”)危险。
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α1-抗胰蛋白缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该致病患者常可采用注射人α1-抗胰蛋白酶来缓解症状。
（1）图1表示获取人α1-抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：
①a过程是在________酶的作用下完成的，该酶的作用特点是。
②c过程称为________，该过程需要的原料是________。
③要确定获得的基因是否是所需的目的基因，可以从分子水平上利用
________技术检测该基因的碱基序列。
（2）利用转基因技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更易获得这种酶，简要过程如图2。
①获得目的基因后，常利用________技术在体外将其大量扩增。
②载体上绿色荧光蛋白（GEP）基因的作用是便于________。基因表达载体d，除图中的标示部分外，还必须含有________。
③若要使转基因羊的后代均保持其特有的性状，理论上应选用________技术进
行繁殖。
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