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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)凝乳酶基因可从构建的凝乳酶基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从前者获取的凝乳酶基因__________（填“含有”或“不含有”）启动子。
(3)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。
(4)构建基因表达载体过程中需要用__________（酶）处理。目的基因转录过程中，__________能使转录在所需要的地方停止下来。
(5)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(6)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_______。
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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。构建的基因表达载体中通常含有标记基因，其作用是__________________。
(3)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(4)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_____________________________________。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用___________法将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵。受体细胞不选用体细胞的理由是______________________。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行___________，目的是确定要培育的个体能产牛奶。
③可采用抗原-抗体杂交法来鉴定转基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。该方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的单克隆抗体，请写出制备该抗体的实验思路___________。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力強而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过___________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有肘需要在引物的5’端设计___________（填“限制酶”/“DNA连接酶”/“RNA聚合酶”）的识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用___________作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，应直接改造的是___________（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用_______法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是______。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行_______，目的是确定要培育的个体能产奶。
③可采用_________法来鉴定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5＇端设计________(填“限制酶”、“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”）识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子(如图2所示)时最好选用__________作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产髙效凝乳酶，应直接改造的是________(凝乳酶蛋白\凝乳酶mRNA\凝乳酶基因）。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是___________________________________________________________________________。
②在胚胎移植前，需进行____________，目的是确定要培育的个体能产奶。
③可采用________法来鉴定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5′端设计________(填“限制酶”、“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”)识别序列，以便构建重组DNA分子。
②下图是该基因工程中使用的质粒，如果至少使用一种限制酶对此质粒进行切割，则可以形__种不同的DNA片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力，操作过程如图所示。请分析回答：
（1）图所示紫外线照射的原理是________，接种用的平板培养基________（是、不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10％脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U），凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图所示，酶催化能力最强的是________组。
②A2、A5组酶活力单位与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测。
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，因为基因突变具有________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是________________。为了验证上述2位同学的假设，可采用________________技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取________________，再反转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因，有时需要在引物的起始端设计________（限制酶、DNA连接酶、RNA聚合酶）识别序列，以便构建重组DNA分子。
②构建重组DNA分子（如图所示）最好选用________________限制酶（填酶的名称），理由是________________。
③工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉生产，毛霉作为受体细胞的优势是___________________________________________________________________。
④研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤依次有________。
a．蛋白质的结构设计
b．蛋白质的结构和功能分析
c．蛋白质结构的定向改造
d．凝乳酶基因的定向改造
e．将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞
f．将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产
凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得______，接种用的平板培养基______（是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是______组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有___________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是______。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用______限制酶。
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（16分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1的a过程目的是获得 ，b的接种方法为 。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（ 通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，有人对此做出了推测：A2、A5组芽孢杆菌虽发生了基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
③将凝乳酶催化能力最强的菌株分离纯化后进行扩大化培养，尽管培养基成分合适、操作正确、培养温度和pH适宜，但凝乳酶的产量比预期偏低。对此，研究人员展开了讨论，认为还有其他因素，如 ，请设计一个实验方案对此因素进行探究（实验方案用表格的形式呈现）。
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（18分，每空2分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得 ，接种用的平板培养基 （是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有 的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述2位同学的假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取 ，再逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因。
②构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用 限制酶。
③研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有 。
a. 蛋白质的结构设计 b. 蛋白质的结构和功能分析
c. 蛋白质结构的定向改造 d. 凝乳酶基因的定向改造
e. 将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞 f. 将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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【生物——选修3：现代生物科技专题】奶酪生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌。请结合下图回答：
（1）利用PCR技术扩增目的基因原理与细胞内DNA复制类似（如左图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含ATP和Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和___________。
（2）为了食品安全，右图所示的表达载体需用___________酶切除抗性基因的部分片段，再用___________酶使表达载体重新连接起来。选用缺失URA3基因的酵母菌作为受体细胞（必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活），为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，所使用的培养基___________（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶。
（3）工业生产过程中，选用大肠杆菌作为受体细胞不能正常表达出凝乳酶，而选用酵母菌则能，原因是酵母菌含有______________________。
（4）测定凝乳酶基因转录的mRNA序列，测得从起始密码子到终止密码子之间的序列为1201个碱基，经判断这段序列的测定是错误的，为什么？_______________________。
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凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：