井式假单胞菌能分解琼脂，产生的脱色酶能将糖蜜发酵废液中的黑褐色色素脱色，可用于治理糖蜜发酵...

井式假单胞菌能分解琼脂，产生的脱色酶能将糖蜜发酵废液中的黑褐色色素脱色，可用于治理糖蜜发酵废液造成的色素污染。请回答下列问题：

（1）为了从取样样品中筛选获得井式假单胞菌，培养基中唯一的碳源是________。从培养基的功能角度分析，该培养基属于_________。

（2）实验小组采用平板划线法分离样品中的井式假单胞菌。操作时，接种环通过____灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_______________。

（3）鉴定井式假单胞菌时，可在培养基中加入__________，再接种。适宜条件下培养一段时间，培养基上出现周围呈现透明圈的圆形凹穴，原因可能是__________________。

（4）进行污染物脱色时，将井式假单胞菌扩大培养以获得更多的细菌。通过不断增加营养物质的比例_______（填“能”或“不能”）提高井式假单胞菌的种群密度，原因是___________。

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琼脂是制备固体培养基必需的材料，避免污染环境，实验室使用过的废弃固体培养基必须经细菌分解才能丢弃。糖蜜发酵废液的黑褐色色素是造成河、湖色泽污染的原因之一，为了脱除这种黑褐色色素，某实验小组从琼脂生产厂附近的土壤中筛选到多株具有脱色能力的琼脂分解菌，其能产生脱色酶，并通过氧化方式进行脱色作用。回答下列问题：

（1）为了筛选可分解琼脂的细菌，在配制培养基时，应选择以_______为唯一碳源的固体培养基进行培养。配制好的培养基需通过_______法进行灭菌。

（2）实验小组可采用_______法分离土壤浸出液中的琼脂分解菌。鉴定琼脂分解菌时，可在培养基中加入_______，适宜条件下培养一段时间，发现培养基上形成圆形凹穴，其形成的原因是_______；应选择_______的菌落进行扩大培养。

（3）进行污染物脱色时，需将琼脂分解菌扩大培养以加速脱色，通过不断增加营养物质的比例能否提高该菌的种群密度，并分析说明原因______________

（4）进行污染物脱色时，可提取琼脂分解菌中的脱色酶固定化后用于脱色，固定化酶的优点有______________（至少答出两点）。

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琼脂是制备固体培养基必须的材料，当实验室大量使用固体培养基时，需要把废弃的固体培养基分解，避免污染环境。糖蜜发酵废液的黑褐色色素所造成的色泽污染是环境保护所不容许的，为了脱除这种黑褐色色素，需要筛选能产生脱色酶的菌体。在从琼脂生产厂区土壤中筛选目的菌时，获得了既能分解琼脂，又具有脱色能力的分解菌。请回答下列问题：

（1）在筛选分解琼脂的细菌时，应选择以_________为唯一碳源的固体培养基，从功能上分析，此培养基属于____________。

（2）在分离细菌时，接种环通过_____________方法灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是_________________________________________。

（3）鉴定具有脱色能力的琼脂分解菌时，需在基本培养基中加入_____________，适宜条件下培养一段时间后，发现培养基上形成圆形凹穴，有的凹穴周围出现透明圈，原因是______________________________。

（4）进行污染物脱色时，也可以将脱色酶进行固定，该技术的优点有___________（至少两点）。

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石油泄漏、城市垃圾、化学杀虫剂造成的水和土壤的污染等等严重威胁着人们的身体健康，环境保护越来越受到人们的重视。回答下列有关问题：

（1）研究发现，一种假单胞杆菌只能分解一种石油，分解效果很差，应用基因工程将分解三种烃类的基因都转移到另一种假单胞杆菌体内，得到了分解石油的“超级细菌”。合格质粒上除了应具备复制原点、启动子、标记基因等组件外，还应该具有的特点有________________、________________。

（2）能用PCR技术获取目的基因的前提是________________，一般情况下至少要经过________________次循环才能得到合格的目的基因，每次循环要经历________________三个变化过程。

（3）2019年是我国在垃圾处理方面改革力度最大的一年，上海成为我国第一个垃圾分类试点城市。根据生态工程原理，对垃圾进行分类处理的积极意义有________________、________________。

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石油污染处理是世界石油工业的一个难题，某科研小组在处理石油污染时偶然发现了一种高效分解烷烃的假单胞杆菌（产生烷烃分解酶A。科硏人员欲利用基因工程大量制备酶A，其实验流程如图所示。分析回答下列问题：

（1）科研人员在分离具有烷烃高效分解酶A的假单胞杆菌时，所选用的是_________（填“鉴别”或“选择”）培养基，培养基中唯一的碳源是__________。为从菌液中获得由单个菌体形成的菌落，一般采用________________法接种。

（2）为获得烷烃分解酶A基因，科研人员采用_______法构建了_________文库，再从该文库中获取。

（3）通过b过程构建的表达载体除含目的基因外，还需要具有的元件有启动子、终止子和_____________，其中启动子的作用是_________________________。

（4）c过程一般要用Ca2+处理大肠杆菌，目的是____________________________。

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餐厨垃圾废液中的淀粉、蛋白质、脂肪等微溶性物质可以被微生物分解并利用，但由于初期有益微生物数量相对较少，存在发酵周期长、效率低等缺点，极易对环境造成污染。

（1）为探究圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌处理某餐厨垃圾废液的最佳接种量比，来制备微生物菌剂，研究者做了如下实验：

①将两种菌液进行不同配比分组处理如下表所示：

将上表菌液分别接种于l00mL__________中进行振荡培养，振荡处理的目的是__________。本实验还需设置对照组为__________。

②培养3天后测定活菌数，取一定量菌液进行__________稀释，然后分别取0. 1mL的菌液采用__________法接种于基本培养基中培养。进行计数时，可依据__________对两种菌进行区分，并选取菌落数在__________内的平板。实验结果如下图所示，由实验结果可知__________。

（2）为进一步探究菌种比例对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪等有机物的降解效果，测得15天内废液中蛋白质、脂肪的含量变化如下图所示：

由实验结果可知分别选取__________的接种比对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪降解效果最好。废液中个别组蛋白质含量在后期升高，分析可能的原因是__________。

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餐厨垃圾废液中的淀粉、蛋白质、脂肪等微溶性物质可以被微生物分解并利用，但由于初期有益微生物数量相对较少，存在发酵周期长、效率低等缺点，极易对环境造成污染。

（1）为探究圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌处理某餐厨垃圾废液的最佳接种量比，来制备微生物菌剂，研究者做了如下实验：

①将两种菌液进行不同配比分组处理如下表所示：

将上表菌液分别接种于l00mL__________中进行振荡培养，振荡处理的目的是__________。本实验还需设置对照组为__________。

②培养3天后测定活菌数，取一定量菌液进行__________稀释，然后分别取0. 1mL的菌液采用__________法接种于基本培养基中培养。进行计数时，可依据__________对两种菌进行区分，并选取菌落数在__________内的平板。实验结果如下图所示，由实验结果可知__________。

（2）为进一步探究菌种比例对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪等有机物的降解效果，测得15天内废液中蛋白质、脂肪的含量变化如下图所示：

由实验结果可知分别选取__________的接种比对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪降解效果最好。废液中个别组蛋白质含量在后期升高，分析可能的原因是__________。

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水产或家畜养殖污水中含有大量的类固醇，而这类化合物会对人体造成危害，且不易被降解，而丛毛单胞菌是日前用于降解这类有机污染物常用的需氧型菌种。由于抗生素的滥用，污水中含有大量的抗生素残余，这些抗生素会强烈地抑制丛毛单胞菌的作用，从而降低污水处理的效果。结合所学知识，回答下列问题：

（1）从自然界中分离出能够降解类固醇化合物的丛毛单胞菌时，一般会从鱼塘废水或附近土壤进行取样，其原因是___________________________________________________________。

（2）筛选丛毛单胞菌时，通常以________________为唯一碳源的选择培养基进行筛选。制备这一培养基的一般步骤包括计算、称量，溶化、______________、倒平板。

（3）研究人员从含抗生素的污水中分离出了3个抗生素耐药型丛毛单胞菌菌株（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）为了测试其在高浓度抗生素条件下的增殖能力，他们进行了如下实验：

①将等量的三种菌株，分别接种到添加了高浓度抗生素和一定量类固醇物质的细菌液体培养基中，测量计算初始培养液中种群密度的相对值，之后不断通入无菌空气，在适宜的条件下进行培养；

②接种培养开始后100小时内，每20小时取样一次，每次每种菌株重复3次计数，常利用_______________法接种进行活菌数的测定，从初始到实验结束，实验过程中需测定计数的样品次数为____________。在测定菌群密度相对值的同时，每次取样还要测定菌液中固醇类物质的浓度。

③下面的曲线图是根据实验过程中所获得的数据绘制而成。

a．与菌株Ⅱ、Ⅲ相比，实验进行到60小时左右时，造成菌株I种群密度下降的原因有______________（填序号）。

①种内斗争加剧　　　　　　　 ②营养物质积累

③营养物质消耗　　　　　　　 ④代谢废物消耗

b．从污水处理的角度分析及研究数据来看，菌株____________更适合作为污水中类固醇污染物的处理，理由是___________________________________________________________________________。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精。请分析回答下列问题：

（1）在制备含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项需要的是______ （ 填序号）。

①酒精灯　 ②接种环　 ③高压蒸汽灭菌锅　 ④培养皿

（2）若要“探究从自然界收集的酵母菌菌株能否利用木糖进行酒精发酵”，请写出实验思路：_______________________________________________________。

（3）将搜集到的酵母菌放人培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数的公式为（C÷V） ×M，其中C代表______________________。

（4）纯化后的酶A可以用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明____________________________________。

（5）生产上常将酶A固定化，部分操作如下：将酶A固定在______（填“溶于水"或“不溶于水”）的载体上，将其装人反应柱内后需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去未吸附的酶A。一般来说，酶不适合采用______法固定化。固定化酶的优点是____________。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精。请分析回答下列问题：

（1）在制备含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项需要的是________（填序号）。

①酒精灯　　 ②接种环　　 ③高压蒸汽灭菌锅　　 ④培养皿

（2）将自然界收集的酵母菌菌株转接到仅以______为碳源的培养基中，_______（填“有氧”或“无氧”）条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。

（3）将搜集到的酵母菌放入培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数的公式为（C÷V）×M，其中C代表______。对于需要长期保存的菌种，可以采用___________的方法。　　　　　　　　

（4）纯化后的酶A可以用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明_____________。　　　　　

（5）生产上常将酶A固定化以反复利用。部分操作如下：将酶A固定在_______（“溶于水”或“不溶于水”）的载体上，将其装入反应柱内后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去未吸附的酶 A。一般来说，酶不适合采用__________法固定化。

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