下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒PO具有四环素抗性基因 ( telr)...

下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒PO具有四环素抗性基因　 ( telr)和氨苄青霉索抗性基因(ampr)。请回答下列问题：

(1)基因工程中所用的目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以 _________。利用PCR技术扩增目的基因片段时，常使用的酶是____ 。

(2)重组载体构建的过程中所需的酶有 ____和 ____。

(3)为进一步鉴定菌体是否含有重组质粒P3，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“-”代表不生长）。

根据表中结果判断，A、B、C菌落质粒导入情况分别是____、____、____。

(4)将目的基因导入动物细胞的常用方法是____。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

(1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是______________________。

(2)据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶________切割目的基因和质粒。

(3)通过PCR技术获取目的基因时需设计________种引物；从cDNA文库中获得的目的基因________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

(4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是________。

(5)图乙农杆菌中的质粒应含有T－DNA，其作用是________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到____________工程。

(6)为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为________，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为________。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

(1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是______________________。

(2)据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶________切割目的基因和质粒。

(3)通过PCR技术获取目的基因时需设计________种引物；从cDNA文库中获得的目的基因________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

(4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是________。

(5)图乙农杆菌中的质粒应含有T－DNA，其作用是________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到____________工程。

(6)为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为________，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为________。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

（1）图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是____。

（2）据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶______________切割目的基因和质粒。

（3）在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是___________________________________。

（4）图乙农杆菌中的质粒应含有T-DNA，其作用是___________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到________工程。

（5）为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为______。

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下图是某质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示酶切后目的基因插入位点。下列有关叙述正确的是（     ）

A．质粒都含有抗性基因，该基因常常作为标记基因

B．将重组质粒1导入一个大肠杆菌，该菌不能在含氨苄青霉素培养基上长出一个菌落

C．为了便于筛选含重组质粒的受体细胞，应首选重组质粒2导入受体细胞

D．将重组质粒4导入大肠杆菌，目的基因至少会表达出一个蛋白质分子

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下图是基因工程中构建生产人乳铁蛋白的重组载体。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用几种限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含哪种抗生素的培养基上进行？

A、1种  四环素  B、2种  氨苄青霉素   C、1种 四环素     D、2种   四环素

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下图a示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检查载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：

（1）pBR322质粒的基本组成单位是________ 。该基因工程中，质粒上的Amr^r、Tet^r称为________基因。

（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是________，由此说明目的基因插入了________中。

（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中

的步骤。该基因工程中的受体细胞是________ 。

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（6分）下图a示基因工程中经常选用的载体－pBR322质粒，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检查载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：

（1）pBR322质粒的基本组成单位是________。在基因工程中，质粒上的Amr^r、Tet^r称为________基因。

（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是________，由此说明________。

（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中的________步骤，该基因工程中的受体细胞是。

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(8分)下图a示基因工程中经常选用的载体一pBR322质粒，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检查载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果(黑点表示菌落)。再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图C的结果(空图表示与b对照无菌落的位置)。据此分析并回答：

(1)pBR322质粒的基本组成单位是________。该基因工程中，质粒上的Amr^r、Tet^r称为_____基因。

(2)与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是________，由此说明目的基因插入________中。

(3)将大肠杆菌培养在含氧苄青霉索、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中的步骤。该基工程中的受体细胞是________。

(4)若用pBR322质粒作为载体，通过基因工程生产食品，是否存在食品安全性问题?试说明理由。________，。

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下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性核酸内切酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是                                       （    ）

A．基因 amp和tet是一对等位基因，常作为基因工程中的标记基因

B．质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA利动植物病毒的DNA

C．限制性核酸内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键

D．有质粒4将目的基顺导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长

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