下图是基因工程中构建生产人乳铁蛋白的重组载体。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用几种限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含哪种抗生素的培养基上进行？
A、1种 四环素 B、2种 氨苄青霉素 C、1种 四环素 D、2种 四环素
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下图是基因工程中构建生产人乳铁蛋白的重组载体。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用几种限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含哪种抗生素的培养基上进行？
A、1种 四环素 B、2种 氨苄青霉素 C、1种 四环素 D、2种 四环素
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下图是基因工程中构建生产人乳铁蛋白的重组载体。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用几种限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含哪种抗生素的培养基上进行？
A、1种 四环素 B、2种 氨苄青霉素 C、1种 四环素 D、2种 四环素
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下图是获得人乳铁蛋白的技术路线。（图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三种限制酶的酶切位点如图所示）
据图回答：
（1）已知人乳铁蛋白基因的全部序列，可通过人工合成法或 技术获得人乳铁蛋白基因。据图分析，过程①表示____ ．，该过程需要的限制酶是___ _。筛选含有重组载体的大肠杆菌，培养基中应另添加____ 。
（2）图中过程②最常用的方法是__ __。体外培养受精卵时，需将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养，C02的主要作用是 。
（3）图中过程___ _（填序号）表示胚胎移植，在胚胎移植前要对代孕牛进行___ _处理。
（4）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用 技术。
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某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：
（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有______________（答出两点即可）。
而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是______________；并且______________和______________的细胞也是不能区分的，其原因是_____________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有是_____________的固体培养基。
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________
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某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：
（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____________（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是___________；并且___________和___________的细胞也是不能区分的，其原因是___________。
（3）在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单
菌落，还需使用含有是___________的固体培养基。
（4）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于___________。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，BAmHI、HinDIII、SmA I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。
（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。
（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（4）对代孕牛的要求是_________________。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。
（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。
（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（4）对代孕牛的要求是_________________。
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人乳铁蛋白是一种药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：
（1）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是___________，酶能起催化作用的原理是____________________________________________。
（2）据图分析筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含______________________（填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_________________________________。
（3）若 BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为___________，对于该部位，这两种酶___________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）培养出早期胚胎后，科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的___________，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。
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人乳铁蛋白是一种药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：
| 限制酶 | BamHⅠ | HaeⅢ | BclⅠ | Sau3AⅠ | NotⅠ |
| 识别序列及切割位点 |
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（1）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_________，酶能起催化作用的原理是_________________________________。
（2）据图分析筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含___________________（填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_________________________________。
（3）若 BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为___________，对于该部位，这两种酶___________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）培养出早期胚胎后，科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的___________，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。
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【选修3：现代生物科技专题】
人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：
| 限制酶 | BamHⅠ | Hae Ⅲ | BclⅠ | Sau3AⅠ | NotⅠ |
| 识别序列 及切割位点 |
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（1）①过程常采用的方法是_____________________________。
（2）构建基因表达载体时，需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和__________________ 之间，这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达。
（3）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是___________。
（4）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含________________ （填“四环素”或“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_____________。
（5）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为__________________________，对于该部位，这两种酶_____________________（“都不能”或“只有一种能”）切开。
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我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：
（1）过程②必需的酶是 ，过程④必需的酶是 。⑤过程中为提高成功率，常用 溶液处理大肠杆菌。
（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共 种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是 。
（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Ampr、Tetr抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选 的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是 ， 。
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